论文部分内容阅读
痕量检材是法医学面临的难题之一,如何从痕量检材中获得更多的信息一直是法医学工作努力的方向。随着全基因扩增技术的出现和单细胞测序技术的发展,痕量检材的难题得到了有效解决。ABO血型作为人类重要的遗传表型已在法医学检测中被广泛使用,传统的血清学能够得到准确的分型结果,以ABO基因中突变位点为技术基础的血型DNA检测方法也得到长足发展。两种技术的结合,不仅能够解决痕量检材的难题,而且能够得到与表型相关的信息,为警方搜索犯罪嫌疑人提供一定的帮助。通过遗传标记进行的身份认证常常用于侦破案件、司法审判及法医亲子鉴定中。在大多数法医DNA检验的实际案件中,所得到的现场检材往往很多都已腐败,甚至是高度腐败,在此类法医学检材中DNA分子受到损害,DNA链发生断裂,使DNA分子的完整性受到极大破坏。随着司法实践的不断深入,对物证证据要求不断提高,需要DNA检验提供更多的信息。应用经典的STRs分型会出现基因漏扩或优势扩增等现象,影响最终的分型结果,从而给法医学实际应用带来极大的困难。单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism, SNP)作为第三代遗传标记具有分布广泛、突变率低、遗传稳定及易于自动化的高通量快速检测分析的特点,同时,因其扩增片段长度短、不存在复制滑动而利于腐败降解、痕量检材的检测,使得SNPs在法医学领域获得了越来越广泛的重视。遗传学家与人类学家通力合作,从人类进化历程、迁徙历史等角度出发,结合基因组测序及全基因组关联分析技术,对人体色素沉积、颅面发育等与人类表型相关的遗传突变进行了深入研究,构建起用于预测嫌疑人基本特征的个体识别体系。随着身份认证及表型相关的SNPs技术体系的构建,法医物证学中一个“DNA智能化”的新时代正在拉开序幕。本论文采用实验室自主研发的汗潜指纹提取液(No.200810233535.8)对痕量指纹脱落上皮细胞进行提取,使用全基因组扩增(Whole Genome Amplification, WGA)技术对痕量DNA进行扩增,并结合SNaPshot技术对与ABO血型相关的6个SNPs位点进行检测,进而对ABO血型进行分型。首先,将SNaPshot检测ABO血型方法应用到在痕量DNA中,并结合实验实际对方法进行了优化与调整。随后,收集到48份指纹上皮脱落细胞,同时采集口腔拭子作为阳性对照,使用优化后的ABO血型检测方法对48份样品进行检测,全部48份指纹上皮脱落细胞均得到检出,47份口腔拭子得到检出(第32号样品的口腔拭子由于操作失误在处理过程中损失)。检出的47份结果能够完全匹配。同时,基因型分型的结果与血清学结果一致。优化后的ABO血型检测方法能够在痕量DNA中实现有效检出,对于某些案件的侦破提供一种可行的方法。