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1研究目的1.1初步了解云南大理HIV阳性者弓形虫感染情况。1.2探讨云南大理HIV阳性者感染弓形虫株B1、GRA6、SAG3基因位点，初步了解云南大理弓形虫基因型，为进一步的分子遗传学研究以及弓形虫病的防制提供资料。2研究方法2.1样本收集血液样本由云南大理白族自治州的艾滋病防治机构提供，经Western-blotting实验方法验证HIV阳性者的血液样本。2.2弓形虫IgM与IgG抗体的检测采用酶联免疫吸附法（ELISA）对HIV阳性者的血液样本进行弓形虫IgM与IgG抗体的检测，筛选弓形虫IgM与IgG抗体阳性的标本。2.3弓形虫基因提取选择弓形虫IgM与IgG抗体阳性的全血标本进行弓形虫基因提取。2.4基因扩增采用经两轮扩增的巢式PCR扩增技术。2.5基因回收、纯化选择B1、GRA6、SAG3基因扩增阳性的产物经琼脂糖凝胶电泳成像后，进行基因产物的回收和纯化。2.6基因的限制性内切酶酶切（RFLP）B1基因选择Pm1I与XhoI内切酶，GRA6基因选择MseI内切酶，SAG3基因选择NciI内切酶。将纯化后产物加入相应的限制性内切酶，消化16小时后，进行琼脂糖凝胶电泳成像。2.7基因的序列测定将巢式PCR技术扩增阳性的B1、GRA6、SAG3基因的产物纯化处理后，送基因公司进行序列测定。3结果3.1本次共检测317份血液样本，其中HIV阳性感染者的血液样本293份，正常对照人群样本24份。云南大理HIV阳性者弓形虫感染率为36.2%，其中弓形虫IgG抗体阳性97份，阳性率为33.1%；弓形虫IgM抗体阳性9份，阳性率为3.1%；健康体检者IgG抗体阳性率4.2%。3.2采用巢式PCR成功扩增出B1基因47份、GRA6基因29份、SAG3基因42份。用相应的限制性内切酶进行酶切，琼脂糖凝胶电泳后可见B1基因有500bp左右大小的条带，GRA6基因有600bp和200bp两条条带，SAG3基因有200bp左右大小的条带。3.3选择样本扩增阳性的弓形虫B1、GRA6、SAG3基因进行序列测定后，与Genbank上注册的弓形虫B1、GRA6、SAG3基因（注册号分别为AF17987.1、AJ635332.1、JX218225.1）序列进行对比，发现上述基因的碱基对之间存在少量的差异和缺失，并在弓形虫SAG3基因序列中的25bp处找到NciI酶切位点(CCGGG)，弓形虫GRA6基因序列中的146bp和690bp处找到MseI酶切位点(TTAA)。4结论4.1云南大理HIV阳性者弓形虫感染率为36.2%，高于该地区正常人群弓形虫抗体阳性率。4.2采用巢式PCR成功从云南大理HIV阳性者弓形虫抗体阳性的全血标本中扩增出B1、GRA6、SAG3基因。4.3云南大理HIV阳性者感染的弓形虫B1、GRA6、SAG3基因酶切的凝胶电泳结果与弓形虫RH株相同，初步判断云南大理HIV阳性者感染的弓形虫基因型以基因I型为主。4.4云南大理HIV阳性者感染的弓形虫B1、GRA6、SAG3基因扩增阳性样本的测序结果显示，弓形虫B1、GRA6、SAG3基因与Genbank上注册的弓形虫RH株基因的碱基对之间仅存在少量的差异和缺失,初步判断云南大理HIV阳性弓形虫感染者基因型与弓形虫RH株一致。4.5云南大理HIV阳性者感染的弓形虫为基因I型，未见基因II型、基因III型和和其它基因型。