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目的:在中医药理论指导下,在阴虚病证模型上,观察知母、酸枣仁提取物抗焦虑作用,探讨作用机理,结合前期工作,探讨补阴安神方组方优化方案。
方法:采用320mg/kg甲状腺片混悬液连续9天灌胃给药,复制小鼠阴虚模型;采用小鼠明暗箱实验、高架十字迷宫实验筛选酸枣仁及知母抗焦虑药效物质及最佳剂量;用正交设计法、均匀设计法,以抗焦虑药效指标筛选熟地黄多糖、百合水提物、酸枣仁、知母药效物质的最佳配伍;采用薄层扫描法测定小鼠脑内γ-氨基丁酸和谷氨酸递质含量,免疫组化法观察γ-氨基丁酸A受体亚单位1(GABA<,A>R<,1>)、N-甲基-D-天冬氨酸受体亚单位1(NMDAR<,2>)的表达。
结果:
研究结果显示:酸枣仁抗焦虑药效物质是酸枣仁醇提物,最佳剂量是0.055g/kg;知母抗焦虑药效物质是知母醇提物,最佳剂量是0.1/kg;用正交设计法、均匀设计法筛选出熟地黄多糖、百合水提物与酸枣仁醇提物、知母醇提物抗焦虑的最佳配伍:熟地黄多糖0.125g/kg、百合水提物0.4g/kg、酸枣仁醇提物0.06g/kg、知母醇提物0.05g/kg,与阴虚模型对照组比较,小鼠灌胃配伍组方制剂剂量为0.635g/kg时,能显著增加小鼠明暗穿箱实验中的穿箱次数,并能显著增加高架十字迷宫中小鼠进入开臂的次数百分率及在开臂滞留时间百分率,与地西泮组比较无显著性差异。
抗焦虑作用机制方面:与阴虚模型对照组比较,小鼠灌胃配伍组方制剂剂量为0.635g/kg能显著降低小鼠脑组织中Glu含量,并可显著提高GABA含量,能使GABA<,A>R<,1>免疫阳性细胞表达显著增加,NMDAR<,1>免疫阳性细胞表达显著减少,与地西泮组比较无显著性差异。
结论:熟地黄多糖、百合水提物、酸枣仁醇提物、知母醇提物配伍在灌胃给予小鼠熟地黄多糖0.125g/kg、百合水提物0.4g/kg、酸枣仁醇提物0.06g/kg、知母醇提物0.05g/kg时,即在灌胃给予小鼠配伍组方制剂0.635g/kg时,具有抗焦虑作用,其作用机理可能与提高脑内GABA含量,增加GABA<,A>R<,1>的表达,降低脑内Glu含量,抑制NMDAR<,1>表达有关。