沙雷氏菌S2基因组序列分析及铬还原酶ChrT基因工程菌除Cr(Ⅵ)特性研究

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目的:对沙雷氏菌S2进行全基因组测序,分析其除铬相关基因,为除Cr(Ⅵ)工程菌的构建奠定生物学信息基础;研究铬还原酶ChrT基因工程菌的除Cr(Ⅵ)能力及影响因素,分析铬还原酶ChrT的除Cr(Ⅵ)活性,同时探究ChrT工程菌的生物学特性稳定性,综合验证工程菌的除Cr(Ⅵ)特性。方法:提取沙雷氏菌S2的DNA,进行基因组测序,分析基因组中的除铬相关基因,从分子水平探讨其除Cr(Ⅵ)机制。比较ChrT工程菌与沙雷氏菌S2、宿主菌E.coli BL21(DE3)的除Cr(Ⅵ)能力,并探索培养条件(pH、温度、碳源和金属离子)对其除Cr(Ⅵ)效率的影响;铬还原酶ChrT经IPTG诱导表达后,用酶促反应鉴定其活性。然后将工程菌连续传50代,每10代进行菌落形态、革兰氏染色、生化反应、质粒稳定性、目的蛋白表达水平和铬还原能力等各项检测,以评价工程菌的遗传稳定性。结果:基因测序得到了沙雷氏菌S2的基因组序列精细图谱,确定其基因组大小为5,604,115 bp;经基因库比对,基因组中含有与铬耐受和铬还原有关的基因12个。工程菌在50 mg/L Cr(Ⅵ)培养基中,48 h后,除Cr(Ⅵ)率可达40%。37℃、pH为7.0是工程菌的最佳培养条件;乳酸钠、乙酸钠、Cu2+、Co2+和Pb2+对其除Cr(Ⅵ)能力具有促进作用。IPTG诱导产生的铬还原酶ChrT,在NADPH为供电体条件下,酶活性可达14.83 U/mg。经传代培养后,各代工程菌的质粒均含铬还原酶ChrT的目的基因片段,革兰染色、生化检测、目的蛋白表达水平均与原始菌株无差异,除Cr(Ⅵ)能力也与原始菌株无统计学差异性(p>0.05)。结论:沙雷氏菌S2基因组中含有除Cr(Ⅵ)相关的基因,可应用于高效除Cr(Ⅵ)基因工程菌的构建。ChrT工程菌及其诱导产生的铬还原酶具有一定的Cr(Ⅵ)还原能力,且该菌种生物学特性稳定,具有修复土壤或水体铬污染的潜力。
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