胡子鲇Cyp19alb和Foxl2基因的克隆、表达及其在性腺分化中的作用

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研究鱼类性别相关基因的表达与性别分化之间的关系,不仅在一定程度上可揭示其性别决定机制,对生产实践中人为干预鱼类性别也具有重要的指导意义。  本文以我国常见淡水养殖的胡子鲇(Clarias fuscus)为研究对象,采用RT-PCR和RACE法,克隆获得脑型芳香化酶基因(Cyp19a1b)cDNA全长序列和Foxl2部分cDNA序列;应用荧光实时定量PCR检测两种基因在前脑、下丘脑、脑垂体、肝和性腺5种组织,以及性腺分化前后(出膜后12~30d)的表达;同时检测芳香化酶抑制剂(Letrozole,200μg/dg)对性腺分化时期Cyp19α1b和Foxl2表达以及17β-雌二醇(17β-E2,300μg/g)和17α-甲基睾酮(17α-MT,200μL/L)对Cyp19α1b表达的影响;组织学方法观测Letrozole对胡子鲇幼鱼性腺分化和生长的影响。结果表明:  Cyp19α1b cDNA全长2347bp,5’端非编码区219 bp,3’端(不包括poly(A))596bp,开放阅读框(ORF)1503bp,编码500个氨基酸,推测其编码蛋白质分子量为56.388kDa;而Foxl2部分cDNA序列为463bp。序列分析及分子系统进化树结果表明,胡子鲇Cyp19α1b氨基酸序列与非洲鲇(Clarias gariepinus)Cyp19α1b同源性最高,达95.6%;但与鱼类性腺型芳香化酶基因(Cyp19α1a)同源性低于62%。同源性分析结果与根据传统形态学和生化特征分类的结果相一致。  荧光实时定量PCR结果显示,Cyp19α1b和Foxl2在胡子鲇上述组织均有表达,其中Cyp19α1b在下丘脑相对表达量最高,肝和精巢最低,在脑部的表达存在明显的雌雄差异,即雌鱼高于雄鱼(P<0.05);而Foxl2在卵巢中的相对表达量远高于其它组织(P<0.05)。胡子鲇性腺分化前(出膜后12d)Cyp19α1b和Foxl2即开始表达,分化前后Cyp19α1b相对表达量无显著差异(P>0.05),而Foxl2相对表达量在分化前最高,但分化后逐渐降低。  Letrozole抑制胡子鲇性腺分化时期Cyp19α1b和Foxl2的表达,而17β-E2和17α-MT促进Cyp19α1b表达。性腺组织学观察显示,100μg/g和200μg/g剂量的Letrozole促进胡子鲇精巢分化,抑制卵巢分化,而50μg/g剂量的Letrozole对其性腺分化没有影响。Letrozole(50μg/g、100μg/g、200μg/g和100μg/L)可抑制胡子鲇幼鱼的生长。  综上所述,Cyp19α1b可能不是引起胡子鲇性腺分化的直接因素,但可能通过“下丘脑-垂体-性腺轴”对胡子鲇性腺分化过程产生间接影响;而Foxl2直接参与胡子鲇的性腺分化。
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