清消法对金黄地鼠皮脂代谢及SREBP-1信号通路的影响研究

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第一部分清消法对金黄地鼠皮脂腺功能及皮脂代谢状态的调节作用研究目的和意义:通过观察金黄地鼠血清激素水平及皮脂腺斑组织形态和脂质分泌水平的变化,探讨清消法对金黄地鼠皮脂代谢的干预作用。研究方法:采用雄性金黄地鼠为动物模型,因其背部皮脂腺斑增生且具有高度依赖雄激素特性,故设对照组,中药(枇杷清肺饮加减方)低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组,西药(安体舒通)组,每组10只。对照组给予10m L/(kg?d)蒸馏水灌胃,中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组分别给予枇杷清肺饮加减方5.63、11.25、22.5g/(kg?d)药液灌胃,西药组给予安体舒通6.25 mg/(kg?d)药液灌胃,连续给药4周。测量各组金黄地鼠皮脂腺斑面积及体重,放免法检测血清中T、E2水平,比色法检测皮脂腺斑组织中NEFA、TG含量,计算各组睾丸系数,HE染色和油红O染色观察皮脂腺斑组织病理学变化。研究结果:1.体重和睾丸系数各组金黄地鼠体重均无显著性差异;与对照组比较,中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组睾丸系数无显著性差异(均P>0.05),西药组睾丸系数明显减小,且差异具有统计学意义(P<0.01)。2.皮脂腺斑外观及面积测量对照组皮脂腺斑颜色深黑且面积较大,中药中剂量组、中药高剂量组和西药组皮脂腺斑颜色均有不同程度变浅且面积缩小,其中中药中剂量组和西药组皮脂腺斑颜色和面积变化最为显著。用药前各组金黄地鼠皮脂腺斑面积比较,差异无统计学意义(P>0.05);用药后,与对照组比较,中药中剂量组、中药高剂量组和西药组金黄地鼠皮脂腺斑面积均显著缩小(P<0.01);与西药组比较,中药中剂量组皮脂腺斑面积差异无统计学意义(P>0.05),中药高剂量组皮脂腺斑面积显著增大(P<0.01);与中药中剂量组比较,中药高剂量组皮脂腺斑面积显著增大(P<0.05)。3.血清激素水平检测与对照组比较,中药中剂量组、中药高剂量组、西药组金黄地鼠血清T水平均显著降低(均P<0.01);与西药组比较,中药中剂量组血清T水平差异无统计学意义(P>0.05),中药高剂量组血清T水平显著升高(P<0.01);与中药中剂量组比较,中药高剂量组血清T水平显著升高(P<0.05)。与对照组比较,中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组和西药组金黄地鼠血清E2水平略有升高,差异无统计学意义(P>0.05)。4.皮脂腺斑组织HE染色对照组:皮脂腺分布呈分叶状,排列紧密,部分腺叶较大,多为2-3层。中药低剂量组:皮脂腺厚度与对照组比较无明显差异,皮脂腺排列紧密;中药中剂量组和西药组:皮脂腺厚度较对照组明显变薄,排列较松散,皮脂腺数目减少,多为1层。中药高剂量组:皮脂腺厚度较对照组薄,皮脂腺数目减少,多为1-2层。5.皮脂腺斑组织油红O染色对照组因皮脂腺增生,皮脂分泌增多,皮脂腺细胞胞浆内可见团状红色脂滴,甚至融合成片,形成大脂滴。与对照组比较,中药中剂量组和西药组金黄地鼠皮脂腺细胞内皮脂积累明显减少,中药低剂量组和中药高剂量组皮脂腺胞内脂质积累略有减少。6.皮脂腺斑局部NEFA和TG含量与对照组比较,中药中剂量组、中药高剂量组和西药组NEFA和TG含量显著降低(均P<0.01);与西药组比较,中药中剂量组NEFA和TG含量差异无统计学意义(P>0.05),中药高剂量组NEFA和TG含量明显升高(P<0.01);与中药中剂量组比较,中药高剂量组NEFA和TG含量明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:1.清消法可有效降低金黄地鼠血清T水平,抑制皮脂腺增生,减少皮脂分泌。2.清消法治疗痤疮的机制可能与降低T水平有关。第二部分基于SREBP-1信号通路探讨清消法调节皮脂代谢的作用机制研究目的和意义:通过检测SREBP-1信号通路相关因子AR、SREBP-1、ACC1 m RNA和蛋白在金黄地鼠皮脂腺斑组织中的表达水平,探讨清消法调节皮脂代谢的作用机制。研究方法:采用RT-q PCR法检测各组金黄地鼠皮脂腺斑组织中AR、SREBP-1c、ACC1 m RNA相对表达量;采用免疫组化检测各组金黄地鼠皮脂腺斑组织AR、SREBP-1、ACC1蛋白分布;采用Western blot检测各组金黄地鼠皮脂腺斑组织AR、SREBP-1、ACC1蛋白相对表达量。研究结果:1.免疫组化检测皮脂腺斑组织中AR、SREBP-1、ACC1蛋白表达与对照组比较,中药中剂量组、中药高剂量组和西药组皮脂腺斑组织中AR、SREBP-1、ACC1蛋白相对表达量显著降低(均P<0.01);与西药组比较,中药中剂量组皮脂腺斑组织中AR、SREBP-1、ACC1蛋白相对表达量无显著变化(P>0.05),中药高剂量组皮脂腺斑组织中AR、SREBP-1、ACC1蛋白相对表达量显著升高(P<0.01);与中药中剂量组比较,中药高剂量组AR、SREBP-1、ACC1蛋白相对表达量显著升高(P<0.05,P<0.01)。2.Western blot检测金黄地鼠皮脂腺斑组织中AR、SREBP-1、ACC1蛋白表达与对照组比较,中药低剂量组AR、ACC1蛋白相对表达量显著降低(P<0.05),中药中剂量组、中药高剂量组和西药组皮脂腺斑组织中AR、SREBP-1、ACC1蛋白相对表达量显著降低(P<0.05,P<0.01);与西药组比较,中药低剂量组AR、ACC1蛋白相对表达量显著升高(均P<0.01),中药中剂量组、中药高剂量组AR、SREBP-1、ACC1蛋白相对表达量显著升高(均P<0.01);与中药中剂量组比较,中药低剂量组AR、ACC1蛋白相对表达量均显著升高(均P<0.01),中药高剂量组AR、SREBP-1、ACC1蛋白相对表达量均显著升高(均P<0.01)。3.金黄地鼠皮脂腺斑组织中AR、SREBP-1c、ACC1m RNA表达水平与对照组比较,中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组和西药组AR、SREBP-1c、ACC1m RNA表达水平均显著降低(均P<0.01);与西药组比较,中药低剂量组、中药中剂量组和中药高剂量组AR、SREBP-1c、ACC1m RNA表达显著升高(P<0.05,P<0.01);与中药中剂量组比较,中药低剂量组和中药高剂量组AR、SREBP-1c、ACC1m RNA表达水平均显著升高(均P<0.01)。结论:清消法可通过降低T水平抑制SREBP-1信号通路的过度激活而改善金黄地鼠皮脂腺斑皮脂代谢异常,从而达到治疗痤疮的目的。
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