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研究背景与目的 世界范围内,胃癌是最常见的恶性肿瘤之一,在恶性肿瘤致死的原因中占第二位。手术仍然是治疗胃癌的主要手段,但是关于胃癌淋巴结的切除范围,目前存在争议,有人主张大范围的淋巴结切除术(D2或更大),认为这样可以避免遗漏转移淋巴结;而有人认为扩大切除术只能增加手术并发症和死亡率,并不延长术后生存时间。术前对胃癌淋巴结转移程度作出判断,可以使医生选择合理的淋巴结切除范围,做到既不遗漏阳性淋巴结,也不盲目扩大淋巴结切除范围。但是目前还没有一个满意的办法能够做到术前正确地评估胃癌淋巴结转移程度,最近,分子生物学标记物在评估胃癌淋巴转移方面得到重视,并提出了胃癌“分子生物学分期”的概念。陷阱因子3(DcR3)是1998年发现的一个属于肿瘤坏死因子受体超家族的因子,并已经证实DcR3表达与胃癌淋巴转移有关系,但是关于DcR3 mRNA表达与胃癌淋巴结转移程度关系还没有报告,DcR3 mRNA高表达是否伴有DcR3基因扩增存在争议,DcR3导致胃癌淋巴转移的机制不清楚。因此,本课题研究DcR3 mRNA表达与胃癌淋巴结转移程度的关系,探讨DcR3 mRNA表达水平评估胃癌淋巴转移分期的价值;研究DcR3 mRNA表达与DcR3基因扩增的关系,探讨DcR3 mRNA高表达是否是DcR3基因扩增的结果;研究DcR3 mRNA表达与VEGF-C、VEGF-D表达的关系,初步探讨表达DcR3的胃癌容易发生淋巴转移的原因,并且同时分析VEGF-C、VEGF-D表达评估胃癌淋巴结转移程度的作用。 研究方法 第一部分:标本来自浙江大学医学院附属第二医院2003年2月-2004年1月间接受手术的62例原发性胃癌病人,以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测胃癌肿瘤组织的DcR3 mRNA表达状况,并以正常粘膜作为对照,PCR扩增产物以琼脂糖凝胶电泳、成像后,再以凝胶电泳图像分析软件分析。计算不同组别病人的DcR3 mRNA表达率,为反映DcR3 mRNA的表达强度,半定量法检测DcR3 mRNA的表达指数,mRNA表达指数以DcR3与β-actin灰度值×面积之比值。数值采用SAS 8.1进行统计学处理,卡方检验或精确概率检验分析正常粘膜与肿瘤组织DcR3 mRNA表达率之于俊秀博士学位论文(中文摘要》浙江大学医学院间的差异、以及不同州分期胃癌肿瘤组织的DcR3 mRNA表达率之间的差异。非参数的Wilcoxon检验比较正常粘膜与肿瘤组织DcR3 mRNA表达指数之间的差异、不同PN分期胃癌肿瘤组织的DcR3mRNA表达指数之间的差异。 第二部分:提取62例胃癌病人的基因组DNA,荧光定量PCR(FQ一PCR)测定胃癌肿瘤组织及正常粘膜DcR3基因的相对扩增倍数,DcR3基因相对扩增倍数二DcR3基因Ct值/p一globin基因Ct值。正常胃粘膜与肿瘤组织DcR3基因相对扩增倍数以配对t检验比较,DcR3 mRNA表达组与不表达组的肿瘤组织DcR3基因相对扩增倍数的差异以student,st检验分析。 第三部分:R不PCR方法测定62胃癌肿瘤组织以及正常粘膜的VEGF一C mRNA、VEGF一mRNA的表达,免疫组化方法测定胃癌肿瘤组织以及正常粘膜VEGF一C蛋白的表达。卡方检验和精确概率检验比较DcR3 mRNA表达组与非表达组 VEGF一C mRNA、VEGF一C蛋白、VEGF一D mRNA表达率的差异,以中相关分析研究DcR3 mRNA表达与VEGF一C mRNA、VEGF心蛋白、VEGF一D InRNA表达的相关性。 研究结果 第一部分:①62例胃癌病人中,34例肿瘤组织DcR3 mRNA表达阳性,阳性率为54.8%(34/62),高于正常粘膜的表达率(24.2%,15/62),(xZ=12.181,尸=0.001)。胃癌肿瘤组织的中位DcR3 mRNA表达指数为0.735(0~2.06),高于正常粘膜的表达指数(中位数为。,。~1.27),(尸<0.0001)。②PNo期胃癌肿瘤组织的DcR3 mRNA表达率为38.5%(5/13),PNI期为40%(10/25),pNZ期为76.9%(10/13),PN3期为81.8%(9/11),胃癌肿瘤组织DcR3 mRNA表达与PN分期有关系(xZ=9.424,p=0.024)。pNZ期胃癌肿瘤组织的DcR3 mRNA表达率分别高于PNO期、PNI期(尸分别为0.047,0031),PN3期胃癌肿瘤组织的DeR3 mRNA表达率也高于PNO、PNI期(p分别为0.047,0.021),而pN。期与PNI期之间的、PNZ期与PN3期之间的胃癌肿瘤组织DcR3 mRNA表达率没有差异。PNZ+PN3期胃癌肿瘤组织的DcR3m州A表达率(79.2%,19/24)高于pNO十pNI期(39.5%,15/38),xZ=9.358,P=0.002。③PNo期、PNI期、PNZ期、PN3期胃癌肿瘤组织的中位DoR3 mRNA表达指数分别为0(o一1.37)、0(o一1.47)、1.32(o一2.ox)、1.27(o一2.06)。p矶期、PN3期胃癌肿瘤组织的DcR3 mRNA表达指数高于正常粘膜,而PN。期、pNI期胃癌肿瘤组织的DcR3 mRNA表达指数与正常粘膜组织没有差异。pNZ胃癌肿瘤组织DcR3 mRNA表达指数分别高于PNO、pNI期(尸分别为0.008,0.007),PN3期胃癌肿瘤组织DcR3 mRNA表达指数也分别高于PNo、PNI期(P分别为0.002,0.002)。pNO期与PNI期之间的、PNZ与pN3期之间的胃癌肿瘤组织neR3 mRNA表达指数无统计学意义的差异。④根据胃癌肿瘤组织DCR3 mRNA表达指数,将病人分为3组:O组、0于俊秀博士学位论文(中文摘要)浙江大学医学院一1,2组、妻1.2组,0组中,PNO+PNI期胃癌病人占82.1%(23/28)、PNZ十PN3期病例占17.9%(5/28);o一1.2组中,pNo+pNI期胃癌病人占75%(12/16)、pNZ+P N3期病例占25%(4/16);)1.2组中,PNO+pNI期胃癌病人占1 6.7%(3八8)、PNZ