从MAPK/NF-κB通路介导的炎症反应研究竹节参总皂苷对自然衰老大鼠结肠屏障功能障碍的调节作用

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目的:研究竹节参总皂苷(SPJ)对自然衰老大鼠结肠屏障功能的调节作用及其分子机制。  方法:  (1)以自然衰老大鼠为研究对象,将SPF级SD雄性大鼠按照月龄分为青年组(6月龄)、自然衰老组(24月龄)和竹节参总皂苷低、中、高剂量组,每组15只大鼠。SD雄性大鼠从18月龄开始,SPJ低、中、高剂量组分别给与竹节参总皂苷10 mg/kg、30 mg/kg、60 mg/kg,对照组给与生理盐水,灌胃至24月龄,每灌胃6天停药1天,持续6个月。  (2)免疫组化法检测结肠紧密连接蛋白Claudin-1和Occludin蛋白表达的变化;  (3) D-乳酸试剂盒检测血清D-乳酸水平的变化。  (4) PCR法检测结肠炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA水平。  (5) Western Blot法检测结肠炎症因子IL-1β、TNF-α、结肠炎症相关蛋白环氧化酶-2(COX-2)、P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 MAPK)细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、核因子kB p65(NF-κB p65)表达水平的变化。  结果:  (1)免疫组化结果显示:与青年组比较,自然衰老大鼠结肠紧密连接蛋白Claudin-1和Occludin蛋白表达减少,而竹节参总皂苷提前干预组与自然衰老组比较Claudin-1和Occludin蛋白表达显著升高。  (2)D-乳酸试剂盒检测结果显示:与青年组比较,自然衰老大鼠血清D-乳酸水平显著升高而竹节参总皂苷各剂量组D-乳酸水平与自然衰老组比较有所降低,其中高剂量组有显著性差异。  (3) PCR法结果显示自然衰老组结肠炎症因子IL-1β、TNF-α的mRNA水平与青年组比较显著升高而竹节参总皂苷各剂量组IL-1β、TNF-α的mRNA水平与自然衰老组比较显著降低。  (4) Western Blot法结果显示与青年组比较,自然衰老组结肠炎症因子IL-1β、TNF-α、结肠炎症相关蛋白COX-2 MAPK/NF-κB通路相关蛋白表达水平均显著升高,而竹节参总皂苷干预组结肠炎症因子IL-1β、TNF-α、结肠炎症相关蛋白COX-2和MAPK/NF-κB通路相关蛋白表达水平均显著,结肠炎症相关蛋白COX-2和MAPK/NF-κB通路相关蛋白表达水平显著下降。  结论:自然衰老大鼠结肠屏障功能发生障碍,形态发生改变,结肠紧密连接蛋白表达减少,血清D-乳酸水平降低,这种改变可能与其增强的肠道炎症反应相关。竹节参总皂苷可以改善其形态抑制肠道炎症反应,其机制与其抑制MAPK/NF-κB通路活性相关。
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