论文部分内容阅读
目的:研究竹节参总皂苷(SPJ)对自然衰老大鼠结肠屏障功能的调节作用及其分子机制。 方法: (1)以自然衰老大鼠为研究对象,将SPF级SD雄性大鼠按照月龄分为青年组(6月龄)、自然衰老组(24月龄)和竹节参总皂苷低、中、高剂量组,每组15只大鼠。SD雄性大鼠从18月龄开始,SPJ低、中、高剂量组分别给与竹节参总皂苷10 mg/kg、30 mg/kg、60 mg/kg,对照组给与生理盐水,灌胃至24月龄,每灌胃6天停药1天,持续6个月。 (2)免疫组化法检测结肠紧密连接蛋白Claudin-1和Occludin蛋白表达的变化; (3) D-乳酸试剂盒检测血清D-乳酸水平的变化。 (4) PCR法检测结肠炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA水平。 (5) Western Blot法检测结肠炎症因子IL-1β、TNF-α、结肠炎症相关蛋白环氧化酶-2(COX-2)、P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 MAPK)细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、核因子kB p65(NF-κB p65)表达水平的变化。 结果: (1)免疫组化结果显示:与青年组比较,自然衰老大鼠结肠紧密连接蛋白Claudin-1和Occludin蛋白表达减少,而竹节参总皂苷提前干预组与自然衰老组比较Claudin-1和Occludin蛋白表达显著升高。 (2)D-乳酸试剂盒检测结果显示:与青年组比较,自然衰老大鼠血清D-乳酸水平显著升高而竹节参总皂苷各剂量组D-乳酸水平与自然衰老组比较有所降低,其中高剂量组有显著性差异。 (3) PCR法结果显示自然衰老组结肠炎症因子IL-1β、TNF-α的mRNA水平与青年组比较显著升高而竹节参总皂苷各剂量组IL-1β、TNF-α的mRNA水平与自然衰老组比较显著降低。 (4) Western Blot法结果显示与青年组比较,自然衰老组结肠炎症因子IL-1β、TNF-α、结肠炎症相关蛋白COX-2 MAPK/NF-κB通路相关蛋白表达水平均显著升高,而竹节参总皂苷干预组结肠炎症因子IL-1β、TNF-α、结肠炎症相关蛋白COX-2和MAPK/NF-κB通路相关蛋白表达水平均显著,结肠炎症相关蛋白COX-2和MAPK/NF-κB通路相关蛋白表达水平显著下降。 结论:自然衰老大鼠结肠屏障功能发生障碍,形态发生改变,结肠紧密连接蛋白表达减少,血清D-乳酸水平降低,这种改变可能与其增强的肠道炎症反应相关。竹节参总皂苷可以改善其形态抑制肠道炎症反应,其机制与其抑制MAPK/NF-κB通路活性相关。