目的:提取人血管内皮生长因子165(VEGF165)基因序列，构建VEGF165慢病毒载体，转染大鼠骨髓间充质干细胞，利用WesternBlot检测其在骨髓间充质干细胞中的表达情况，寻求基因手段预防硬膜外瘢痕的方法。　　 方法:　　 (1)调取VEGF165基因序列:从基因库找到VEGF165的基因序列，设计引物attB1-k-VEGF165-F,VEGF165-attB2-R。　　 (2)目的载体的构建:利用聚合酶链反应(PCR)方法将设计好的引物，模板DNA，底物等等进行反应，得到VEGF165DNA，再利用Gateway技术将VEGF165基因序列克隆至入门载体，进而克隆至目的载体，从而得到含有VEGF165序列的表达载体。　　 (3)慢病毒的包装:取细胞状态良好，处于对数生长期的293FT细胞，细胞计数后，培养过夜。第二天转染前去除旧的培养液，加入5mL新鲜的含10％血清DMEM培养液等待转染。制备DNA-Lipofectamine2000复合物，复合物里含有pLV/helper-SL3，pLV/helper-SL4，pLV/helper-SL5，目的载体，培养基等等。将DNA-Lipofectamine2000复合物一滴一滴地添加到293FT细胞中，轻轻地前后摇晃培养皿以混匀复合物。转染后48小时收集培养上清进行浓缩;加入10ml新鲜的培养液继续培养，转染后72小时再次收集浓缩;分装好的病毒放置-80℃保存。测定滴度。　　 (4)骨髓干细胞的提取和培养:取SPF级4-5周SD雄性大鼠一只，取大鼠股骨和胫骨的骨髓，早期培养原代接种后前三次换液，每24小时换一次。由于细胞前期增殖极其缓慢，所以不需要按照常规的操作进行，大概5-7天进行换液。前期的维持培养过程大概需要40-60天，期间的换液以5-7天左右换一次。待骨髓间充质干细胞纯化后，传代一次，即可进行转染。　　 (5)WesternBlot检测:待检测的样品分别为:大鼠骨髓间充质干细胞，转染了eGFP的大鼠间充质干细胞，转染了VEGF165的间充质干细胞。提取蛋白后，用核酸蛋白测定仪测定样品蛋白总浓度和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，再进行蛋白质的电转移以及膜的封闭。最后进行抗原抗体反应和显色，置于FiuorchemHD2凝胶成像分析系统中观察，拍照。　　 结果:利用分子生物学技术成功构建慢病毒VEGF165载体，VEGF165组测定的病毒滴度为4.7×107，eGFP组为6×107。转染骨髓干细胞48小时后荧光显微镜下观察VEGF165组的转染率为40-50％，eGFP组的转染率可达90％以上。转染VEGF165的骨髓干细胞与未传染VEGF165基因的骨髓干细胞比较，转染后的细胞高表达VEGF165。　　 结论:构建的VEGF165慢病毒载体成功转染骨髓干细胞，并能够稳定表达，为预防硬膜外瘢痕形成的研究提供了基因治疗的理论基础。