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研究背景在我国,肝癌是发病率和死亡率均较高的恶性肿瘤之一,因早期症状不明显,多数患者发现时已经为中晚期,错过了最佳治疗时机。原发性肝癌按照病理类型可分为肝细胞肝癌、胆管细胞肝癌及混合细胞型肝癌3种,其中90%为肝细胞肝癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC),因此,我们以肝细胞肝癌为研究对象。目前,临床常规使用的肝癌相关标志物仍主要为甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP),但AFP在敏感性及特异性方面都存在一定缺陷。α-烯醇化酶(α-enolase,ENO1)作为糖代谢过程中的一种关键酶,在细胞能量代谢过程中发挥重要作用。此外,ENO1还具有多种生物学功能与其细胞内定位有关。近年,大量研究证明ENO1表达量的变化与多种疾病有关,尤其与肿瘤发生、发展密切相关。已有研究证实,相较于正常癌旁肝脏组织,肝癌组织中ENO1的表达要高,且ENO1的高表达可促进肝癌细胞的增殖、侵袭、迁移、去分化,抑制肿瘤细胞的凋亡。因此,我们提出假设:肝细胞肝癌患者血液中可能存在ENO1,且与肿瘤的进展具有相关性,ENO1有望成为肝细胞肝癌早期诊断和监测的潜在指标。研究目的1.检测肝细胞肝癌患者血液中是否存在ENO1水平升高;2.不同肝纤维化程度的慢性肝病患者血液ENO1浓度是否存在差异;3.肝细胞肝癌患者血清中ENO1的浓度变化与肿瘤临床分期及病理分级之间是否存在相关性;4.比较ENO1、AFP及ENO1联合AFP的诊断价值,探索ENO1用于肝细胞肝癌辅助诊断的临床价值。对象及方法本研究共入组90例肝细胞肝癌患者、45例肝硬化患者和45例肝纤维化患者,患者血清样品取自于2017年10月-2019年8月解放军总医院第七医学中心和解放军第305医院肝病科、肝胆外科、肿瘤科收治的患者,45例健康对照组标本取自305医院体检中心健康查体者。收集实验对象的一般资料及相关临床信息,利用ELISA试剂盒检测血清中ENO1浓度水平。对检测结果进行统计学分析,探究肝细胞肝癌患者血液中是否存在ENO1的升高。然后将肝细胞肝癌患者进一步细分,探究ENO1浓度水平与肝癌分期、分级间的关系。最后,通过受试者工作特征曲线(ROC曲线)对ENO1进行诊断价值分析并与目前临床上最常用的AFP进行比较并建立联合检测模型,探讨ENO1作为新的血液指标用于肝细胞肝癌的临床应用价值。研究结果1.HCC组ENO1浓度水平为74.40(27.27,122.27)ng/ml,显著高于LC组 29.3(19.3,45.2)ng/ml(U=1081,P<0.01)、LF 组 20.4(16.8,24.5)ng/ml(U=579.5,P<0.01)以及 NC 组 16.0(13.1,22.0)ng/ml(U=402.0,P<0.01):2.LF 组 ENO1 浓度低于 LC 组(U=579.5,Z=-6.747,P<0.01),高于 NC组(U=385.5,Z=-5.06,P<0.01),随着肝组织由正常向肝纤维化、肝硬化的不断演变,ENO1浓度呈现一定的上升趋势;3.根据 TNM 分期分组,B 组(Ⅲ期-Ⅳ期)ENO1 浓度为 72.55(30.73,155.84)ng/ml 高于 A 组(Ⅰ 期-Ⅱ 期)59.75(24.46,94.88)ng/ml(U=695.5,Z=-2.043,P<0.05);4.根据Edmondson分级分组,乙组(Ⅲ级、Ⅳ级)ENO1浓度为85.07(53.27,157.74)ng/ml 高于甲组(Ⅰ级、Ⅱ级)51.00(23.56,105.96)ng/ml(U=606,Z=-2.405,P<0.05):5.诊断价值分析:ENO1的ROC曲线下面积为0.790(0.729～0.851)。根据约登指数最大法选取54.9ng/mL为最佳截断值,此时诊断肝细胞肝癌的灵敏度为57.8%,特异度为88.9%,准确度为76.44%,阳性预测值为77.6%,阴性预测值为75.95%。AFP的ROC曲线下面积为0.823(0.760～0.886),选取10.05ng/mL作为最佳截断值时,诊断灵敏度为76.7%,特异度为82.2%,准确度为80%,阳性预测值为73.4%,阴性预测值为84.73%;6.ENO1联合AFP诊断ROC曲线下面积为 0.853(0.804～0.902),高于任一指标单独检测。并联为阳时,灵敏度与阴性预测值值分别为93.3%,94.3%,准确度为81%。串联为阳时,特异度与阳性预测值分别为97.0%,90.5%。与ENO1、AFP任单一检测比较,二者联合检测可以进一步提高诊断效能。结论ENO1可作为肝细胞肝癌诊断相关的生物标记物,其血清水平高低与肿瘤临床分期、病理分级间存在关联,与AFP联合检测的诊断价值优于ENO1与AFP的任一单项检测,并串联合可提高诊断的灵敏度或特异度,分别更适用于肝细胞肝癌的筛查或确诊,ENO1还有作为肝纤维化的动态监测指标的潜力,具有较高的临床应用价值。