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众所周知,食品安全问题是全球密切关注的问题,尤其是水产品中的兽药残留,如氟喹诺酮类和氯霉素类等。我国通过发布部门公告或限量标准规范水产品中药物的残留量,然而一些新兴易滥用化合物,如渔用麻醉剂,在水产品养殖、运输或销售过程中大量使用并导致药物残留,对人体存在潜在危害。因此,发展建立水产品中易滥用药物的检测方法意义重大。本课题拟以吡喹酮、利福平、丁香酚以及三卡因四种渔药为研究对象,开展单克隆抗体的制备以及开发间接竞争酶联免疫吸附法（indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,ic-ELISA）和胶体金试纸条分析方法。通过分析吡喹酮、利福平、丁香酚和三卡因四种小分子化合物的抗原决定簇特点,设计半抗原偶联位点,将其分别与载体蛋白牛血清白蛋白（BSA）、钥孔血蓝蛋白（KLH）、鸡卵清白蛋白（OVA）等进行偶联制备完全抗原,免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤细胞技术筛选单克隆抗体。最终成功筛选了抗吡喹酮抗体2A11、抗利福平抗体4F1、抗丁香酚抗体2C9和抗三卡因抗体4B5四株杂交瘤细胞。交叉反应实验表明抗体2C9对丁香酚、异丁香酚、甲基丁香酚和甲基异丁香酚有不同程度的交叉,属于群选性抗体;抗体2A11、4F1和4B5对类似药物的交叉率均小于5.0%,为高选择性抗体。对抗体的亲和性进行表征,亲和常数Ka分别为3.143×109 L/mol、2.533×109 L/mol、1.321×109 L/mol和7.527×108 L/mol。其对应的抗体亚型分别为IgG1、IgG2a、IgG2a和IgG2b。基于制备的单克隆抗体建立了ic-ELISA检测方法。首先,对抗体或抗原浓度进行了优化,其次对测定液中有机溶剂含量、离子强度和pH进行优化,吡喹酮、利福平、丁香酚和三卡因四种渔药的单克隆抗体半数抑制浓度(IC50)分别为1.517 ng/m L、5.312ng/m L、42.884 ng/mL和43.399 ng/m L;标准曲线的线性范围(IC20～IC80)分别为0.541ng/m L～4.251 ng/m L、1.698 ng/m L～16.620 ng/mL、11.711 ng/m L～157.041 ng/m L和11.824ng/m L～159.292 ng/m L。选择常见的鱼肉样本（青占鱼）作为基质样本,通过添加回收实验评估ic-ELISA方法。其中,当吡喹酮添加浓度为0.5、2.0、4.0 ng/g时,回收率为91%～97%,变异系数为3.871%～5.137%;利福平添加浓度为2.0、8.0、16 ng/g时,回收率为89%～96%,变异系数为2.524%～4.466%;丁香酚添加浓度为25、50、150 ng/g时,回收率为89%～93%,变异系数为1.879%～2.181%;三卡因添加浓度为25、50、150 ng/g时,回收率为87%～95%,变异系数为2.660%～3.246%。此外,采用胶体金分别标记四种单克隆抗体,发展基于胶体金试纸条的检测方法。分别对胶体金标记条件和检测溶液等进行优化,通过鱼肉样本评估试纸条的检测性能。吡喹酮在鱼肉样本中的消线值小于5 ng/g;利福平的消线值小于100 ng/g;三卡因的消线值小于500 ng/g;丁香酚的消线值小于1000 ng/g,其结构类似物异丁香酚、甲基丁香酚和甲基异丁香酚的裸眼消线值均在5000 ng/g以下。