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本论文建立了单一检测卵转铁蛋白、杏仁过敏原蛋白、花生过敏原蛋白的胶体金免疫层析试纸条,并在此基础上建立了能够同时检测杏仁、花生两种坚果过敏原蛋白的胶体金免疫层析试纸条的检测方法。研制检测卵转铁蛋白胶体金免疫层析试纸条,胶体金颗粒的粒径为20 nm；金标抗体连接的最佳pH值为8.5、最适抗体量为25μg/mL;捕获抗体的包被浓度为1.3mg/mL,二抗、金标抗体稀释倍数为1：80和1：5；选择Millipore HF135s的硝酸纤维素膜作为固相载体；标品稀释液为pH 8.5的PBST缓冲溶液；对NC膜采用0.01%酪蛋白、PBS稀释作为封闭处理液,封闭1h；金标垫0.5%Tween-20处理,检测限为15ng/mL,与白蛋白有交叉反应,与其他过敏原蛋白无交叉反应,10 min得到检测结果。研制检测杏仁过敏原胶体金免疫层析试纸条,胶体金颗粒的粒径为20 nm；金标抗体连接的最佳pH值为9.0、最适抗体量为36μg/mL;捕获抗体的包被浓度为1.3mg/mL,二抗、金标抗体稀释倍数为1：200和1：6：对NC膜采用2%的BSA、PBS稀释作为封闭处理液,封闭1h；其他工作条件与卵转铁蛋白胶体金免疫层析试纸条方法相同,检测限为100 ng/mL,无交叉反应,具有良好的特异性,10 min得到检测结果。研制检测花生过敏原胶体金免疫层析试纸条,胶体金颗粒的粒径为20 nm；金标抗体连接的最佳pH值为9.0、最适抗体量为25μg/mL;捕获抗体的包被浓度为0.5mg/mL,二抗、金标抗体稀释倍数为1：100和1：5；其他工作条件与另外两种胶体金免疫层析试纸条方法相同,方法检测限为25 ng/mL,无交叉反应,具有良好的特异性,10 min得到检测结果。研制杏仁-花生过敏原同步检测胶体金免疫层析试纸条,其中金标抗体封闭物BSA含量为在杏仁兔抗中添加40μL、花生兔抗中添加30μL,其余工作条件与单一检测试纸条方法一致。方法对杏仁和花生过敏原的检测限分别为100 ng/mL、25 ng/mL,无交叉反应,10 min得到检测结果。本文建立的方法操作简便快速、结果判断容易,适用于大量样品的快速筛选。通过对实际样品的添加过敏原蛋白和过敏原阳性样品的检测,并与购买的Neogen商业化过敏原检测试剂盒对试纸条的检测结果的有效性进行对比验证,可以检测出过敏原标签指示不明的食品,有助于食物过敏原的排查。