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目的：比较各种不同类型的乳腺癌细胞系中非编码小RNA分子miR-34a和与肿瘤转移相关的重要转录因子Twist1的表达,探讨乳腺癌中miR-34a与Twist1之间的表达关系,寻找新的肿瘤转移调控的信号通路,为肿瘤的诊断和治疗提供新靶标新通路,探索作为抑癌基因的miR-34a在抑制肿瘤转移中的可能临床意义。方法：首先用micro RNA特异性试剂盒(miRNeasy Mini Kit)提取含有miRNA的总RNA,应用特异性茎-环反转录实时PCR(stem-loop reverse transcription real-time PCR)技术检测miR-34a在五种乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-435、T47D、BT549和MCF-7中的表达和比较分析。并应用RT-PCR检测了这些乳腺癌细胞系中Twist1的1mRNA表达。然后,为了进一步研究乳腺癌细胞系中miR-34a与Twist1的这种表达调控关系,我们应用分子克隆技术建立了pLKO-Tet-On-shTwist1慢病毒表达载体,获得了该慢病毒；在内源性高表达Twist1的MDA-MB-435和4T1细胞系中,转染了pLKO-Tet-On-shTwist 1慢病毒,分别构建了稳定沉默Twist1基因的这两种细胞系及其对照细胞系。应用特异性茎-环反转录实时PCR技术检测DOX诱导对MDA-MB-435和4T1乳腺癌细胞中miR-34a表达的影响。与此同时,应用实时荧光定量PCR技术和Western blot方法,从mRNA和／或者蛋白水平检测了Twist1的表达。另外,在我们过表达Twist1的HEK-293细胞系中,用特异性茎-环反转录实时PCR技术检测了DOX诱导Twist1表达后对miR-34a的表达的影响。结果：提取的总RNA质量完好,应用特异性茎-环反转录实时PCR技术,miR-34a在所检测的高侵袭性乳腺癌细胞MDA-MB-231, MDA-MB-435和BT-549中呈低表达,而在低侵袭性细胞MCF7和T47D中呈相对高表达。Twist1则在高侵袭性乳腺癌细胞MDA-MB-435和BT549细胞系中表达高,而在低侵袭性乳腺癌细胞MCF7和T47D中表达较低。由此可见,乳腺癌细胞系中miR-34a与Twist1表达呈反比关系。我们还建立了使Twist1基因沉默的pLKO-Tet-On-shTwist1载体,获得了MDA-MB-435-shTwist1和4T1-shTwist1这两种细胞系及其阴性对照(ctrl)的MDA-MB-435和4T1细胞系。在这些细胞系中使用了针对Twist1的RNA干扰技术,加入DOX诱导使Twist1基因沉默,诱导Twist1表达降低；与此同时,用特异性茎-环反转录实时PCR技术检测miR-34a在可诱导MDA-MB-435和4T1shTwist1基因沉默的乳腺癌细胞中的表达,并进行比较分析。我们发现在shTwist1基因沉默的MDA-MB-435-shTwistl和4T1-shTwistl细胞系中,基因沉默Twist1时miR-34a表达均升高。另外,我们在已经构建好的可诱导稳定过表达Twist1的HEK-293-Twistl细胞系及其阴性对照的HEK-293细胞系中,加入DOX诱导使Twist1基因过表达。特异性茎-环反转录实时PCR结果表明在过表达Twist1的该细胞系中,miR-34a表达反而降低。结论：建立了特异性茎-环反转录实时PCR检测非编码小RNA分子技术；MDA-MB-435和4T1细胞系中成功构建了可诱导稳定表达的shTwist1基因沉默的细胞系；miR-34a与Twist1表达呈反比关系,这提示miR-34a和Twist1可能存在一定的相互调控关系,miR-34a作为抑癌基因可能在抑制肿瘤转移中起重要作用,在乳腺癌的诊断、预防和治疗中具有重要的潜在价值。miR-34a与Twist1之间是否存在直接的调控关系还有待进一步研究。