论文部分内容阅读
目的:研究BCL-6基因对人乳腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响及其上游调控机制。方法:1.应用qRT-PCR技术检测两株正常乳腺细胞和六株乳腺癌细胞中BCL-6mRNA的表达情况。从六株乳腺癌细胞中筛选出BCL-6高表达和低表达的两株乳腺癌细胞进行下一步实验。2.通过MTT、Soft Agar和Transwell体外功能实验检测BCL-6对人乳腺癌细胞增殖、非锚定生长、侵袭及迁移能力的影响。3.采用裸鼠实验观察BCL-6对裸鼠体内成瘤能力的影响。4.应用生物信息学方法及双荧光素酶报告实验(Luciferase assay)预测并验证潜在靶向BCL-6的miRNA。5.通过qRT-PCR和western-blot方法检测转染靶向BCL-6miRNA mimics后BCL-6mRNA和蛋白的表达情况。结果:1. qRT-PCR结果显示,BCL-6mRNA在六种乳腺癌细胞株中的表达均明显高于两种正常乳腺细胞(P<0.05);从六株乳腺癌细胞中筛选出BCL-6高表达的T47D和低表达的MCF-7两株乳腺癌细胞进行下一步实验。2.体外功能实验结果显示,BCL-6能够促进乳腺癌细胞的增殖、非锚定生长、侵袭及迁移的能力。3.体内裸鼠实验表明,注射了BCL-6稳定表达的MCF-7细胞的裸鼠,所形成的肿瘤体积明显大于对照组(P<0.05)。4.生物信息学方法预测发现miR-339-5p是潜在靶向BCL-6的miRNA之一,Luciferase assay进一步验证了它们的直接靶向关系。5. qRT-PCR和western-blot实验结果显示,转染miR-339-5p mimics后,BCL-6mRNA和蛋白表达水平显著下调。结论:1. BCL-6基因能够促进人乳腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力,可能成为乳腺癌有价值的分子标记物。2. BCL-6的表达受到miR-339-5p的调节。