目的：构建含有Hygromycin抗性的稳定表达HBV的细胞研究模型。方法:构建pSEH-Flag-HBV重组质粒，经酶切和测序鉴定，脂质体2000转染HepG2细胞，Hygromycin筛选，ELISA检测细胞上清液HBsAg、 HBeAg的表达情况，选择HBsAg、 HBeAg表达量均高的细胞株进行下一步的检测，PCR、Southern blotting检测细胞内HBV DNA，RT-PCR检测细胞HBx、Hygromycin基因mRNA的表达，Westernblotting检测细胞C蛋白的表达。结果:成功构建HBV全基因克隆质粒pSEH-flag-HBV，转染HepG2细胞后，培养液上清HBsAg, HBeAg阳性，Western blotting检测HBc在蛋白水平有表达，RT-PCR检测到HBx、Hygromycin在mRNA水平有表达，Southern blotting验证了HepG2细胞基因组中有HBV片段的单一整合。结论：重组质粒pSEH-flag-HBV能在HepG2细胞中稳定复制、转录和表达。