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目的:分别采用杆状病毒昆虫表达系统和pDisplay表达质粒体外表达hGITRLaa52-177蛋白;建立BA-ELISA法,检测hGITRL蛋白。方法:（1）PCR扩增获得hGITRLaa52-177基因,克隆入pFastBacHTa转移载体,在E.coli DH10Bac内通过转座子Tn7的介导,得到重组杆粒,通过脂质体将其转入Tn细胞,收获病毒并进行传代,将病毒感染Tn细胞表达目的蛋白。通过SDS-PAGE、Western blot及间接免疫荧光染色分析融合蛋白的表达。（2）PCR扩增获得hGITRLaa52-177基因,构建重组载体pDisplayhGITRLaa52-177,并利用脂质体转染HEK-293细胞,Western blot检测培养上清,鉴定目的蛋白的表达。（3）将两株针对不同抗原表位的抗hGITRL杂交瘤细胞（Dh8,Dd9）接种Balb/c小鼠腹腔,收获腹水,采用饱和硫酸铵盐析粗提IgG。将Dh8 mAb与活化生物素BNHS耦联,制备生物素化抗体（Bio-Dh8mAb）。并以Dd9 mAb作为包被抗体,以Bio-Dh8 mAb作为检测抗体,建立双抗体夹心ELISA法检测hGITRL蛋白。结果:（1）利用杆状病毒昆虫表达系统表达hGITRLaa52-177蛋白,先将hGITRLaa52-177基因成功克隆入转移载体pFastBacHTa,并在E.coliDH10Bac内通过将小Tn7转移到杆粒上的小attnTn7靶位点而产生杆状病毒的重组杆粒。在Tn细胞中通过异源基因重组分泌出重组杆状病毒,将重组病毒感染Tn细胞后,细胞CPE变化明显,通过间接免疫荧光染色,发现细胞内存在目的蛋白,通过Western blot鉴定,显示hGITRLaa52-177融合蛋白相对分子质量约为18KD左右（融合蛋白N端含有6×His序列和TEV序列）。（2）PCR扩增获得hGITRLaa52-177基因,克隆入pDisplay载体,成功构建pDisplay-hGITRLaa52-177重组质粒,通过脂质体转染HEK-293细胞,培养48h后收集细胞培养上清,将上清浓缩后进行Western bolt,检测到分泌型蛋白的表达,分子量约为14KD。（3）成功制备Bio-Dh8 mAb,初步建立检测hGITRL的BA-ELISA法。利用该方法检测梯度稀释的原核表达的hGITRL蛋白,结果显示吸光度随蛋白浓度呈现一定的线性变化,但方法的稳定性仍需进一步的加强。结论:利用杆状病毒昆虫表达系统及pDisplay质粒,在真核细胞中成功表达hGITRLaa52-177蛋白;初步建立检测hGITRL的BA-ELISA法,为进一步研究hGITRL的生物学功能及临床应用提供了试验基础。