目的为了获得四黄止痢复方中药提取物（Extract from compound Chinese medicine Sihuangzhili,ECCS）、获悉ECCS抗禽致病性大肠杆菌（Avian pathogenic Escherichia coli,APEC）作用机制及其治疗效果,本研究开展了建立ECCS多组分HPLC检测方法、优化其制备工艺参数、研究其体外抗APEC-O₂的活性、对毒力基因的影响及体内治疗效果系列实验,为ECCS的进一步的研究提供实验依据。方法以四黄止痢复方中药（黄芩、黄柏、大黄、黄连、板蓝根、甘草）为原料,甲醇为提取溶剂,用浸渍法提取,设计浸渍温度、浸渍时间、液料比、甲醇体积分数4个因素为自变量,黄芩苷、盐酸小檗碱含量及干膏率综合评分为因变量,采用高效液相色谱法（HPLC）测定含量。以单因素试验结果为基础,用Design-expert软件设计三因素三水平,响应面法建立数学模型,得到最优制备工艺参数,制备ECCS;利用肉汤二倍稀释法测定ECCS对APEC-O₂菌的最小抑菌浓度（MIC）;吸光光度法检测ECCS对细菌生长曲线、胞内核酸物质和能量代谢活力的影响;利用荧光定量PCR技术,检测ECCS在亚抑菌浓度下对APEC-O₂四种主要毒力基因tsh、iss、ibeA和fimC表达量的影响;用亚抑菌浓度ECCS预处理攻毒菌液,观察ECCS对APEC-O₂致病性的影响;以APEC-O₂构建蛋鸡病理模型,设ECCS治疗组（高、中、低3个剂量）、化药对照组、中药对照组,观察治疗效果、鸡只体重的变化。结果1、四黄止痢复方中药多组分HPLC检测方法为:色谱柱Kromasil C18柱（250mm×4.6 mm,5μm）,流动相甲醇（A）-0.1%磷酸水（B）梯度洗脱,检测波长278 nm,流速1.0 mL/min,进样体积10μL,柱温25℃。最佳提取工艺为:浸渍时间146 min、料液比1:333（g/mL）、甲醇体积分数80%。在此条件下,干膏率为17.44%,其中黄芩苷质量浓度为209.28 mg/g、盐酸小檗碱质量浓度为168.17 mg/g。2、ECCS对APEC-O₂的MIC为125 mg/mL;1₄ MIC^MIC（31.25¹25mg/mL）浓度ECCS能够显著抑制APEC-O₂的正常生长,使核酸等内容物外泄（P<0.01）;也显著抑制琥珀酸脱氢酶（SDH）和苹果酸脱氢酶（MDH）的活性（P<0.01）,且呈浓度依赖性。3、1₈ MIC¹₂ MIC组ECCS处理APEC-O₂后,对各种毒力基因的表达均有一定的调控作用,且呈浓度依赖性;尤其当ECCS的浓度为1₄ MIC（31.25 mg/mL）时,能显著抑制tsh、iss和fimC基因的表达（P<0.01）,其相对表达量较空白组相比均减少超过了40%。ibeA基因在ECCS浓度为1₂ MIC时表达量呈显著升高（P<0.01）;1₄ MIC浓度ECCS可使APEC-O₂发病率、死亡率降低,且进一步证实了iss、tsh和fimC基因均在APEC-O₂对宿主的致病性中起着重要的作用。4、浓度为2 g/L的ECCS混饮治疗可对人工感染禽大肠杆菌病起到良好的治疗效果,并显著提高病鸡的增重水平。结论建立了ECCS多组分的HPLC检测方法,优化了制备工艺参数;获悉ECCS可以通过使APEC-O₂细菌胞内核酸物质外泄、影响其能量代谢、调控其毒力基因表达发挥抑制APEC-O₂作用;ECCS对APEC-O₂人工感染禽大肠杆菌病有较好的治疗效果,且可促进病鸡生长。