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目的:本研究旨在鸭乙肝动物模型和2215细胞的基础上,探讨芒果苷抗乙型肝炎病毒(HBV)的免疫分子机制和细胞信号转导途径,为芒果苷治疗乙型病毒性肝炎(HB)提供科学可靠的理论依据。 方法:1.芒果苷对鸭乙肝动物模型脾细胞细胞因子mRNA表达影响的研究筛选1日龄DHBV-DNA(-)北京雏鸭,经腿胫静脉注射上海麻鸭DHBV-DNA强阳性血清,建立鸭乙型病毒性肝炎模型。将DHBV阳性雏鸭随机分为芒果苷高、中、低剂量组、模型对照组、阳性对照组和正常对照组,分别给予相应药物进行干预。连续给药14天,于末次给药后次日取脾脏。采用逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测芒果苷对鸭脾细胞内IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-18等细胞因子mRNA表达的影响。 2.芒果苷对2215细胞MAPK信号转导通路影响的研究以HBV基因转染的人肝癌细胞系2215细胞为模型,取对数生长期的2215细胞,随机分为芒果苷高、中、低剂量组和正常对照组。在不同时间段分别给予相应的药物进行干预,采用免疫印迹法(Western blotting)检测芒果苷对2215细胞MAPK信号转导通路中ERK、JNK、p38表达水平的影响;取对数生长期的2215细胞,随机分为TGF-β+芒果苷高、中、低剂量组和TGF-β对照组。在不同时间段分别给予相应的药物进行干预,采用Western blotting检测芒果苷对2215细胞MAPK信号转导通路中ERK、JNK、p38活性的影响。 结果:1.芒果苷对鸭乙肝动物模型脾细胞细胞因子mRNA表达影响的研究 RT-PCR分析结果显示,芒果苷高剂量组(200mg/kg)可增加鸭脾细胞中IL-18、IL-2、IFN-γ和TNF-α mRNA表达水平(P<0.05);芒果苷中剂量组(100mg/kg)可增强IL-18和IFN-γ mRNA表达水平(P<0.05),对IL-2和TNF-α mRNA表达水平有上调的趋势(P>0.05);芒果苷低剂量组(50mg/kg)对IL-18、IL-2、IFN-γ和TNF-αmRNA表达水平无影响;IL-18、IL-2、IFN-γ和TNF-α四者之间表达水平呈正相关性。 2.芒果苷对2215细胞MAPK信号转导通路影响的研究 Western blotting研究结果显示,芒果苷高、中、低剂量组对2215细胞MAPK信号转导通路中ERK、JNK及p38三种蛋白的含量均无影响。与TGF-β对照组比较,TGF-β+芒果苷高剂量组(100μg/mL)在药物干预10min、30min、60min和120min时均可以不同程度的抑制2215细胞MAPK信号转导通路中JNK蛋白的活性(P<0.05~0.01),但对p38和ERK的活性无影响;TGF-β+芒果苷中剂量组(50μg/mL)在药物干预的相应时间段对JNK蛋白的活性均有抑制的趋势(P>0.05),对p38和ERK的活性无影响;TGF-β+芒果苷低剂量(25μg/mL)组对三条通路的蛋白活性无影响。 结论:1.芒果苷可能是通过提升脾细胞中IL-18、IL-2、IFN-γ和TNF-α等细胞因子的表达水平,增强机体的Th1细胞免疫反应,从而达到抗HBV的作用。 2.芒果苷可明显抑制2215细胞MAPK信号转导通路中JNK蛋白的活性,提示阻断JNK/MAPK信号转导通路可能是芒果苷抑制HBV在肝细胞内复制的途径之一。