论文部分内容阅读
目的： 1、利用离子通道的基因SCN5A上心源性猝死相关突变建立一种SNaPshot微测序试剂盒； 2、应用建立的SCN5A基因微测序试剂盒检测并了解山西人群SCD易感突变的类型特征。 方法： 本方法的原理结合多重复合PCR技术和SNaPshot微测序技术检测心源性猝死相关离子通道基因SCN5A上的45个突变位点：（1）结合国内外已发表的文献和NCBI数据库筛选得到与心源性猝死(SCD)相关的SNP位点；（2）对含有SNP位点的每一对PCR引物进行单独PCR扩增，以验证每个扩增产物的特异性。其中每对上下游引物之间最少含有一个待测SNP，最多含有5个待测SNP；（3）为了将扩增效率最大化，将30对引物分成两个体系（体系1st含14对引物，体系2nd含16对引物）分别进行多重PCR 扩增，得到复合扩增产物。（4）对两组复合扩增产物所包含的 SNP 分别进行检测（体系1st含有22个SNP，体系2nd含有23个SNP），其原理结合了SNaPshot微测序技术和毛细管电泳（CE）技术检测突变碱基的类型和位置，从而确定样本在SCN5A上45个SNP的分型。针对SNaPshot的分型结果，对含有SNP多态性的扩增产物直接测序进行确认。 结果： 1、成功建立了包含SCN5A基因上共45个突变位点的SNaPshot微测序检测体系。 2、对SCN5A的45个突变位点进行检测，发现44个位点与国内外文献和NCBI数据库的记录一致。但是，参与本研究的人群中位点 rs1805124（H558R）存在多态性。 3、对位点 rs1805124（H558R）在本研究中三组样本 DNA 的分型情况进行统计学分析。位点rs1805124（H558R）的Sanger直接测序结果和本实验建立的检测体系结果一致。 结论： 针对心源性猝死相关基因 SCN5A 建立的微测序检测试剂盒可以同时利用多重复合PCR和SNaPshot微测序技术来筛查多态性位点。该试剂盒可用作以下用途：（1）作为判断法医心源性猝死的一种遗传学检测工具；（2）可以用来调查心源性猝死相关基因突变的遗传背景和家系的的遗传特征；（3）甚至可以为优生优育和精准治疗提供了遗传学依据。