论文部分内容阅读
包虫病是全球分布最广泛的人畜共患寄生虫病之一,造成世界范围严重的公共卫生问题。我国27个省、自治区、直辖市均有包虫病病例报告,98.2%的报告病例分布于内蒙古、四川、西藏、甘肃、青海、宁夏、新疆等7个省、自治区,在主要流行区周边的陕西、山西、云南等省也有流行,受威胁人口约为6600万。本研究针对包虫病特异性和敏感性抗原筛选难的问题,以期利用免疫学技术及细胞工程方法建立抗棘球绦虫单克隆抗体细胞株,为后续检测棘球绦虫提供基础的候选材料。制备的棘球绦虫(Em PSC)可溶性抗原,用弗氏完全或不完全佐剂免疫Balb/c小鼠,经ELISA检测,筛选出血清抗体效价达到1:80000以上的Balb/c小鼠。对前述高血清效价鼠取脾,与SP2/0细胞融合,通过亚克隆和ELISA试验筛选出稳定且效价高的单克隆抗体细胞株,对筛选出的抗棘球绦虫单克隆抗体细胞株进行抗体类型测定及染色体核型分析。将前述获得的单克隆细胞,腹腔注射Balb/c小鼠,制备腹水,经ELISA检测其腹水抗体效价。本研究用Em PSC高免Balb/c小鼠,经ELISA检测,得到2只血清效价达到1:80000以上的小鼠。将前述2只小鼠的脾细胞分别与SP2/0融合,通过亚克隆和ELISA检测,共筛选出2株抗多房棘球蚴单克隆抗体细胞,分别命名为1G11和1C1,并传代培养25代,其效价均高且稳定。其中1G11单克隆抗体细胞株抗体亚型为Ig G1,轻链为kappa链,染色体平均86对;1C1细胞株抗体亚型为Ig G2b,轻链为kappa链,染色体平均91对。通过体内腹水制备,1G11抗棘球绦虫单克隆抗体细胞株腹水约制备10 m L,经ELISA检测效价可达1:1280000,1C1抗棘球绦虫单克隆抗体细胞株腹水约制备12 m L,经ELISA检测效价可达1:640000。本研究获得2株抗棘球绦虫(Em PSC)单克隆抗体细胞株(分别命名为1G11和1C1),1G11株抗体亚型为Ig G1,轻链为kappa链,染色体平均86对;1C1株抗体亚型为Ig G2b,轻链为kappa链,染色体平均91对。1G11株制备约10 m L腹水,经ELISA检测效价可达1:1280000,1C1株制备约12 m L腹水,经ELISA检测效价可达1:640000。为棘球绦虫相关科学实验提供候选材料。