第一部分维生素D受体基因Fok I多态性与自身免疫性糖尿病的关系目的:①探讨维生素D受体（VDR）基因Fok I多态性与自身免疫性糖尿病（T1DM和LADA）的关系;②探讨VDR基因Fok I多态性对谷氨酸脱羧酶抗体（GADA）滴度的影响。对象与方法:研究对象为T1DM患者241例,LADA患者354例,T2DM患者473例,正常对照380例。采用PCR-RFLP方法检测VDR基因Fok I多态性,放射配体法检测GADA滴度,放射免疫法检测胰岛素和C肽;分析VDR基因Fok I多态性与糖尿病、GADA滴度及胰岛β细胞功能的关系。结果:①全体观察对象VDR基因Fok I基因型符合Hardy-Weinberg平衡;②VOR基因Fok I多态性在对照组和糖尿病组间比较,糖尿病组ff基因型和f等位基因频率（22.3%,48.1%）高于正常对照（17.9%,42.8%）,而FF基因型和F等位基因频率（26.1%,51.9%）低于正常对照组（32.4%,57.2%）（P＜0.05）;③LADA组ff基因型分布频率（27.1%）高于正常对照组（17.9%）,而T2DM组FF基因型分布频率（24.1%）低于正常对照组（32.4%）,差异具有统计学意义（P值分别为0.028、0.011）;此外,T1DM组VDR基因Fok I基因型分布与LADA组基因型分布差异具有统计学意义（P=0.041）,而与对照组比较无统计学差异;携带ff基因型人群中LADA患病相对危险性增加（OR值为1.707,95%的可信区间为1.201～2.427）;④在LADA患者中,GADA滴度在ff组最高（0.1742）,Ff基因型组次之（0.1363）,FF基因型最低（0.1104）,基因型ff组显著高于FF组（P＜0.05）;⑤分别以GADA滴度0.3和0.8为切点,将LADA组分为高滴度组（GADA≥0.3,0.8,LADA-1组）和低滴度组（GADA＜0.3,0.8,LADA-2组）,无论在切点0.3或者0.8,LADA-1组与正常对照比较,VDR基因Fok I基因型分布差异均具有统计学意义（P＜0.01）,而LADA-2的Fok I基因型分布与对照组比较无差异（P＞0.10）。在切点0.8,LADA-1组与LADA-2组比较,VDR基因Fok I基因型分布差异具有统计学意义（P=0.009）;而在切点0.3,VDR基因Fok I基因型在LADA-1组与LADA-2组中的分布差异无统计学意义（P=0.179）。⑥在T1DM组,VDR基因Fok I3种基因型之间临床及代谢指标差异均无统计学意义（P＞0.05）;Ff基因型组与ff基因型组的FCP、PCP均低于FF基因型组,差异具有统计学意义。⑦在LADA组,VDR基因Fok I 3种基因型之间临床及代谢指标无差异（P＞0.05）;Ff基因型组与ff基因型组的FCP低于FF基因型组,差异具有统计学意义（P＜0.05）。HOMA-IS在FF组最高,Ff基因型组次之,ff基因型最低;HOMA-IR在ff组最高,Ff基因型组次之,FF基因型最低,但二者均无统计学意义（P＞0.05）。结论:VDR基因Fok I多态性与T1DM遗传易感性不相关,与GADA滴度亦不相关。VDR基因Fok I ff基因型与LADA风险增加有关,可能是LADA遗传易感基因之一。LADA患者VDR基因Fok I多态性与GADA滴度相关,其VDR基因Fok I ff基因型与高GADA滴度呈正相关。第二部分自身免疫性糖尿病单核细胞表面CD14、TLR2和TLR4的表达目的:观察自身免疫性糖尿病患者外周单核细胞表面CD14、TLR2和TLR4的表达。对象与方法:1型糖尿病患者（T1DM）16例、成人隐匿性自身免疫糖尿病患者（LADA）18例、2型糖尿病患者（T2DM）22例和正常对照23例,用化学分离法获得外周血单个核细胞（PBMC）后,磁珠分离法获取纯化的单核细胞,使用流式细胞仪（FCM）检测单核细胞表面CD14、TLR2和TLR4的表达。用酶联免疫法（ELISA）检测血清IL-1β和TNF-α水平。结果:LADA患者单核细胞表面CD14表达显著高于T1DM、T2DM和正常对照人群（P＜0.001）,而T1DM患者单核细胞CD14的表达较正常人群低（P=0.002）,T2DM患者单核细胞CD14水平与正常对照组相比无显著差异（P＞0.05）。LADA和T2DM患者单核细胞表面TLR4表达高于T1DM和正常对照（P＜0.05）,LADA与T2DM比较无差异（P＞0.05）。各组人群单核细胞TLR2表达均未发现有差异性（P＞0.05）。各组糖尿病患者IL-1β和TNF-α水平均较高,正常人群IL-1β低于可检测值。结论:T1DM和LADA单核细胞表面CD14、TLR2和TLR4表达的变化,提示自身免疫性糖尿病可能存在天然免疫调控的改变。第三部分维生素D3对自身免疫性糖尿病单核细胞的免疫调节作用目的:探讨1,25（OH）₂D3对自身免疫性糖尿病单核细胞的免疫调节作用。方法:体外培养的外周单核细胞分别从23例正常对照、16例1型糖尿病患者（T1DM）、18例成人隐匿性自身免疫糖尿病患者（LADA）以及22例2型糖尿病患者（T2DM）中获得。观察1,25（OH）₂D3预干预后,单核细胞对TLR2配体（脂磷壁酸,LTA）和TLR4配体（脂多糖,LPS）的反应性变化以及单核细胞表面CD14,TLR2和TLR4表达变化。流式细胞仪分析单核细胞CD14,TLR2和TLR4表达以及NF-κB-p65磷酸化水平,IL-1β和TNF-α水平用酶联免疫吸附法（ELISA）检测。结果:LPS和LTA降低T1DM,T2DM和正常对照组单核细胞表面CD14的表达,而增加LADA组单核细胞表面CD14的表达（P＜0.05）;LTA对单核细胞表面TLR2表达的影响在T1DM、LADA、T2DM和正常对照组间比较无差异（P＞0.05）;LPS使正常对照组单核细胞表面TLR4表达下降的幅度明显高于T1DM、LADA和T2DM组（P＜0.05）。LPS和LTA干预后,T1DM、LADA和T2DM单核细胞NF-κB-p65磷酸化水平和IL-1β和TNF-α浓度均明显高于正常对照组（P＜0.001）;1,25（OH）₂D3预干预后,LPS和LTA对单核细胞表面CD14、TLR2和TLR4表达、NF-κB-p65磷酸化水平和IL-1β和TNF-α浓度的影响各组间比较无差异（P＞0.05）。结论:LPS和LTA刺激可降低正常对照组和T1DM单核细胞表面CD14的表达,而升高LADA单核细胞表面CD14的表达,这可能是LADA的一个特异性表现。1,25（OH）₂D3预干预后,T1DM和LADA单核细胞在TLR配体刺激下CD14、TLR2和TLR4的表达、NF-κB-p65磷酸化水平以及IL-1β和TNF-α浓度均与正常对照组相似。研究结果表明1,25（OH）₂D3对T1DM和LADA患者单核细胞的高反应性具有一定的免疫调节作用,这有助于我们近一步地认识和探讨1,25（OH）₂D3作为自身免疫性糖尿病治疗的价值。