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添加乳酸菌可以增加原料中乳酸菌数量,使青贮尽快进入乳酸菌主导的发酵阶段。然而目前对于可溶性糖较少的牧草,仍然缺乏有效的乳酸菌制剂而不能进行很好地青贮保存。乳酸菌剂在青贮中的应用机理方面的研究还不够深入,且不同的青贮条件对乳酸菌添加剂的使用效果的影响还需探明。本研究从青贮饲料中分离乳酸菌,筛选生长快产酸高的菌株;研究它们对不同牧草青贮品质,微生物数量,有氧稳定性,体外产气动力学的影响;继而将筛选到的优质菌株在不同的条件下使用,研究原料收获时期、含水量、WSC含量、青贮密度和贮藏温度对乳酸菌菌剂添加效果的影响。其主要结果如下:(1)从青贮饲料中筛选得到生长快、产酸高的乳酸菌15株:LB、LPL1、LPL2、LPL3、LCL、 WH、LP1、LP2、LP3、LC1、LC2、PP1、PP2, EF1、EF2。通过常规生理生化试验以及16S rDNA序列同源性分析进行鉴定,其中LB属于短乳杆菌Lactobacillus brevis, LPL1、LPL2、LPL3、LP1、 LP2、LP3属于植物乳杆菌L. plantarum, LCL、LC1、LC2属于干酪乳杆菌L. casei, PP1、PP2属于戊糖片球菌Pediococcus pentosaceus, EF1属于粪肠球菌Enterococcus faecalis, EF2属于屎肠球菌E.faecium。(2)单独添加乳酸菌可提高羊草(Leymus chinnsis)、苜蓿(Medicago sativa)、象草(Pennisetum purpureum)等青贮饲料的发酵品质,而对天然草地野生牧草青贮发酵品质的改善效果不明显。LB、LPL1、LPL2、LPL3、LCL、WH能提高羊草青贮饲料有氧稳定性,LB减缓了羊草和赖草(Leymus secalinus)青贮饲料的有氧变败。LP1和LC1与纤维素酶的混合添加可提高苜蓿和象草青贮饲料的体外消化率。(3)不同条件会影响牧草青贮品质及微生物丰富度a.牧草不同的收获时期、含水量、青贮密度与贮藏温度对牧草青贮品质影响很大。羊草在较高青贮密度(600 kg m-3)和较早刈割(抽穗早期)条件下,青贮品质较好,且较早刈割(抽穗早期)的消化性能较好;苜蓿适当晾晒后青贮,青贮品质较好,在20℃,30℃条件下贮藏, Lactobacillus的丰富度最高,.青贮品质更好;b.不同的条件下乳酸菌剂的使用均能改善牧草青贮发酵品质。LP1和LC1能提高晾晒和未晾晒处理的苜蓿青贮饲料发酵品质。LP1和LC1提高了两个时期刈割的羊草青贮饲料的发酵品质,但对其消化性能没有改善。LB、LPL1、LPL2、LPL3、LCL、WH在两个青贮密度条件下均提高了羊草青贮饲料的发酵品质。在较低青贮密度(500kg m-3)和较晚刈割(抽穗晚期)时,添加乳酸菌也能获得较好的青贮品质;c.苜蓿青贮饲料在40℃条件下贮藏时,Garciella丰富度较高,丁酸生成量较高;而在20℃和300C条件下,添加LP1和LC1后Lactobacillus比例升高。(4)通过构建工程菌的方式尝试将木聚糖酶基因xynA导入LP1。将木聚糖酶基因xynA整合到穿梭质粒pMG36e,成功构建重组质粒pMG36e-xynA。