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目的:探讨脑缺血再灌注后海马Caspase-3 mRNA及其蛋白表达规律,从分子水平探讨针刺对脑缺血再灌注损伤中最关键的凋亡执行蛋白酶Caspase-3的调节作用机制,并初步观察腧穴与非腧穴在针刺效应上的差异。
方法:将健康成年雄性II级SD大鼠(下同)100只,体重250±30g,随机分为两大组:原位杂交组和免疫组化组,每组50只大鼠,每组内部再随机分为正常组、假手术组、模型组、穴位针刺组、非穴位针刺组.每组10只大鼠。模型组、穴位针刺组、非穴位针刺组参照改进的Longa(1989年)线栓法制成大脑中动脉局灶性脑缺血(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,于缺血后2h再灌注。假手术组大鼠只分离暴露颈总动脉、颈外动脉、颈内动脉,结扎颈外动脉。正常组不进行手术处理。穴位针刺组取穴依据中国针灸学会实验针灸研究会制定的“动物针灸穴位图谱”,取“内关”(双侧)、“人中”、“百会”、“风府”。非穴位针刺组取上述各穴向左侧平移0.5cm处,共五个点。参考Bederson6级5分法于再灌注后和再灌注24h后进行神经行为学评分,并在再灌注后的神经行为学评分之后予电针治疗,选用XS-998B光电治疗仪,频率f2,刺激强度以保持针刺局部轻微抖动为度。各组均留针20min。再灌注24h后分别用原位杂交技术和免疫组化技术检测相应组别大鼠海马Caspase-3mRNA及蛋白的表达。
结果:1、再灌注后模型组、穴位针刺组、非穴位针刺组三组神经行为学评分均增高,但组间没有统计差异(P>0.05)。再灌注24h后神经行为学评分显示模型组评分高于穴位针刺组,且模型组与穴位针刺组比较差异有显著性(P<0.05),模型组与非穴位针刺组比较无统计学差异(P>0.05),非穴位与穴位针刺组比较无统计学差异(P>0.05)。再灌后和再灌后24h比较,各组评分均减少,但模型组前后无差异,穴位针刺组与非穴位针刺组两组前后有差异(P<0.05)。2、再灌后24h正常组Caspase-3mRNA及蛋白表达最少,假手术组与正常组之间无差异(P>0.05)。模型组Caspase-3mRNA及蛋白表达最多。针刺治疗可以降低大鼠脑组织海马Caspase-3的含量,与模型组比较有差异(P<0.05),且穴位针刺组针刺效应优于非穴位针刺组,两者比较差针刺对脑缺血再灌注模型大鼠海马Caspase-3 mRNA及蛋白表达的影响异有显著性(P<0.05)。
结论:Caspase-3参与了脑缺血再灌注损伤,针刺能够改善脑缺血再灌注后大鼠的神经功能损伤,其作用机制可能是通过下调海马Caspase-3 mRNA及蛋白表达,抑制凋亡实现的。且腧穴在针刺效应上与非腧穴比较,具有相对特异性。