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野菊花系菊科野生草本植物野菊(ChrysanthemumindicumL.)的干燥头状花序。自古以来野菊花即为常用清热解毒之中药。本课题分别对野菊花抗炎免疫和抗肿瘤有效部位进行筛选,并对有效部位的化学成分作了进一步分离。主要研究内容包括以下五方面:
1、首次通过抗炎活性筛选得到野菊花抗炎有效部位,并研究该部位对环磷酰胺诱导免疫功能低下小鼠的免疫调节作用。研究发现,野菊花抗炎有效部位YP-3(150,300mg*kg-1,ig)能显著提高环磷酰胺诱导小鼠脾细胞产生溶血素水平以及DNFB诱导的DTH反应,提示其不仅能提高淋巴细胞产生抗体水平,还能使T细胞活化。同时,YP-3(150,300mg*kg-1,ig)能显著提高小鼠血清抗体IgM、IgG产生水平,提示其可能通过促进B细胞增殖和分化为分泌抗体的浆细胞,而增强体液免疫功能;另外,YP-3(150,300mg*kg-1,ig)能显著增强单核-巨噬细胞的吞噬功能,促进单核-巨噬细胞将抗原呈递给B细胞。以上研究结果表明YP-3具有抗炎作用和免疫调节作用。
2、采用柱色谱,薄层色谱和低压液相色谱从YP-3中分离得到了3个黄酮成分,分别为蒙花苷、木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷,提示抗炎免疫作用可能与黄酮类化合物有关。
3、以总黄酮含量为指标,探讨有效部位野菊花总黄酮的提取纯化工艺。提取工艺的优化条件是95%乙醇15倍量回流提取2次,每次2h。纯化野菊花总黄酮的优化工艺参数为:AB-8大孔吸附树脂,原液上样浓度1.2~1.5mg/mL,最大吸附量为16.8mg/g干树脂,吸附速度为1BV/h,上样2次,吸附时间为0.5h,洗脱剂为50%乙醇,用量为4BV,洗脱速度为4BV/h,树脂可重复使用3次。结果表明,树脂对野菊花总黄酮具有良好的吸附性能,总黄酮纯度能达到33.9%,比粗提物纯度(5.7%)提高了近5倍,应用AB-8大孔吸附树脂纯化野菊花总黄酮得到了满意的效果。
4、采用了二甲苯诱导的小鼠耳肿胀、角叉菜胶诱导的大鼠足肿胀、棉球诱导的大鼠肉芽肿作为一般性炎症模型,经典的佐剂性关节炎(AA)大鼠模型作为免疫性炎症模型研究了野菊花总黄酮的抗炎作用,并对其抗炎免疫作用机制作进一步探讨。野菊花总黄酮(100,200mg*kg-1)可明显抑制AA大鼠原发性和继发性炎症反应,能使AA大鼠低下的脾淋巴细胞增殖反应和IL-2水平产生恢复接近正常水平,而且能降低AA大鼠腹腔巨噬细胞过高的IL-1、PGE2、TNF-α的产生,在降低AA大鼠腹腔巨噬细胞培养上清中MDA和NO水平的同时,提高AA大鼠腹腔巨噬细胞培养上清中过低的SOD含量。提示,野菊花总黄酮对AA大鼠的治疗作用与其改善AA大鼠异常的细胞免疫功能,平衡细胞因子水平,降低脂质过氧化,恢复抗氧化酶活性等有关。
5、首次对野菊花的抗肿瘤活性部位进行筛选,并对活性部位作进一步分离,得到4个化合物,筛选出2个活性成分化合物Ⅰ和Ⅱ,采用光谱方单晶x-线衍射法鉴定了化合物Ⅰ的结构为(1R,9S,10S)-10-羟基-8(2,4二炔己叉)-9-异戊酰-2,7-双氧代[5,4]癸烷。同时提供了化合物Ⅱ~Ⅳ的主要光谱数据,为进一步研究提供了基础。