嗜盐脂肪酶产生菌的筛选、酶学性质及基因组文库的初步构建

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极端环境微生物以其特殊的生理机能适应了高温、低温、高酸碱度、高盐、高压等恶劣生存条件,独特的生存环境形成了其特有的代谢方式并能够产生许多具有特殊功能的生物活性物质,如极端酶及抗生素等,它们在医药、食品、农业、化工、环保等领域有着重要的应用前景。 从内蒙古锡林浩特地区盐湖菌种样品中筛选到一株嗜盐脂肪酶高产菌Z4,Z4菌株为革兰氏阴性杆菌,生长温度范围为30~60℃,最适生长温度为42℃,生长NaCl范围0.5~5mol/L,最适生长NaCl浓度为3.5mol/L。结合生理生化特征和16SrDNA序列分析结果,将其鉴定命名为HaloterrigenathermotoleransZ4,属于嗜盐耐热古生菌。 Z4菌株的产酶属于生长耦联型,其最适产酶条件为pH8.0、50℃和NaCl3.5mol/L;Z4菌株可以利用多种诱导物产酶,添加1%橄榄油作为诱导物产酶效果最好。 以p-NPB为底物对Z4菌株所产脂肪酶性质进行了研究,结果显示:金属离子Ba2+、Fe2+和Cu2+对酶具有激活作用,酶活不同程度地提高了20~30%;受PMSF的完全抑制;该酶受到EDTA、SDS和DMSO的抑制,酶活不同程度地下降了20~30%;该酶对NaCl有较高的依赖专一性,在无盐条件下发生不可逆变性,至少需要0.5mol/LNaCl维持活性,并且高浓度NaCl对于提高其热稳定性有一定作用。醇类物质对于提高酶的热稳定性有一定作用,丙三醇效果最好。该酶对短链底物p-NPB(对硝基苯酚丁酸酯)最适水解条件为:pH8.0、70℃、3.5mol/LNaCl,水解活力为14U/mL;对长链底物p-NPP(对硝基苯酚十六酸酯)最适水解条件为:pH8.0、80℃、2.5mol/LNaCl,水解活力为13U/mL。 同时本文尝试构建了嗜盐菌基因组文库,为筛选嗜盐脂肪酶基因工作奠定基础。
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