目的:本课题是研究脑脊液二代测序技术在病毒性脑炎诊断中的应用,通过其临床及实验室验证评价该技术应用于临床进行精准诊断的价值。方法:留取入组患者脑脊液1ml存入脑脊液试管中,并在30min内将样本保存于-20℃冰箱进行冷冻。取冷冻后脑脊液样本300ul,使用DNA提取试剂盒(BGI,华大生物科技有限公司,中国武汉)提取DNA。提取的DNA经超声打破至200～300 bp大小的片段,加上接头序列,环化形成单链环状DNA,再滚环扩增2-3个数量级,生成DNA纳米球。使用BGISEQ-50测序平台(中国华大基因)构建DNA文库。应用 Agilent2100生物分析仪(Agilent Technologies,美国Santa Clara公司)质控文库插入片段大小,使用定量PCR(赛默飞世尔科技公司)质控DNA文库浓度。应用BGISEQ-50的测序平台(天津华大研究所)进行测序。结果:最后入组的53例患者中,通过脑脊液NGS测得阳性24例,其中测得1例伪狂犬病毒致病引起的脑炎,这是世界首次发现并报道人罹患伪狂犬病毒脑炎;临床及实验室验证11例,用χ2检验对脑脊液NGS结果及临床实验室验证进行统计学分析,用McNemar检验进行验证,得到P＜0.05,有统计学意义。结论:1.脑脊液NGS技术具有更高的敏感性,在诊断病毒性脑炎方面,脑脊液NGS技术较传统实验室方法更有优势。2.脑脊液NGS技术可以发现一些新的或罕见的致病病原微生物。