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十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestrisv.campestris,Xcc)属革兰氏阴性细菌,是研究植物病原细菌与宿主植物相互作用的模式菌株之一,能侵染包括许多重要经济作物在内的所有十字花科植物,造成农作物的大量减产。Ⅲ型分泌系统和im效应物与植物病原细菌的致病密切相关,由/wP基因簇编码。hrp和和hrpX是Xanthomonas最关键的调控基因,位于hrp基因簇的旁侧。HrpG调控hrpX,HrpX是一个类AraC家族的转录激活子,它调控包括hrp基因簇调控单元hrpB到hrpF在内的大多数HrpX调控元基因的表达。在很多HrpX调控元基因的启动子区都存在两个cis-元件:一个是植物诱导启动子盒(Plant-inducible promoter,PIP-box),另一个位于PIP-box下游30-32 bp的-10区的序列。HrpX可以通过结合到PIP-box来调控相关基因的表达,该cis-作用元件被认为对基因的转录活性有重要作用。本研究致力于寻找在受hrpX调控的模式中,有PIP-box和没有PIP-box的调控机制的异同。按照有严谨的PIP-box、非严谨PIP-box和没有PIP-box三个不同的标准随机挑选出9个基因号,通过5’RACE确定其转录起始位点,用Fusion PCR对-10 box进行点突变构建GUS融合报告菌株。研究发现,转录起始位点多是A56或者T33。文献中提到的-10 box即是-10区,且在六个基因号的-10 box中倒数第二个碱基是C。说明与茄青枯病菌(Ralstoniasolanacearum)和水稻白叶枯病菌(Xoryzaepv.oryzae)-10区YANNDT不同的是,在十字花科黑腐病菌中-10 box模式为YANNNT,其中Y(C/T),N(A/G/T/C)。选取-10 box YANNNT 中 N 分别为 A、C、T、G 的基因,它们分别是XC5268、X0JTC1553、AC3160,将其进行碱基置换,构建了 48个启动子GUS融合报告菌株。在XCM2诱导培养基中检测GUS酶活,发现XC0052(除突变体G外)、XC1553、。YC3160无论是野生型还是碱基置换后的突变体,在8004△hrpX和8004△hrpG中的GUS酶活均比在Xcc 8004中有显著的降低,说明JXC1553、XC3160均受hrpX和/wpG的调控。XC0052 C-G后其GUS酶活在8004△hrpX和8004AhrpG中的趋势并不一致。XC0268的野生型报告菌株在XCM2培养基中变蓝,但是进行碱基置换的突变导入到野生型8004菌株、8004AhrpX和8004AhrpG中均不变蓝。细菌单杂交结果未能确定HrpX是否与启动子区进行结合。说明PIP-box与-10 box对十字花科黑腐病菌启动子的转录活性起到了重要作用,但具体机制还需进一步的研究。