【摘 要】
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狍是我国的重要经济动物,在东北地区广泛分布。近些年,由于过量狩猎,其野生种群数量急剧减少。因此,对狍的遗传多样性以及种群遗传结构进行研究,保护好有限的野生狍资源是一项紧迫
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狍是我国的重要经济动物,在东北地区广泛分布。近些年,由于过量狩猎,其野生种群数量急剧减少。因此,对狍的遗传多样性以及种群遗传结构进行研究,保护好有限的野生狍资源是一项紧迫的任务。
随着现代分子生物学的飞速发展,应用分子遗传标记对野生动物的遗传变异进行研究较为准确。有关野生狍遗传标记研究的报道较为少见,从分子水平上对中国东北狍遗传变异的研究尚未见报道。为了初步了解中国东北区狍遗传资源的遗传结构,本研究采集了中国东北地区3个区系的9个狍群体,通过线粒体DNA(mtDNA)控制区的部分序列变异、随机扩增微卫星多态性(RAMP)标记以及微卫星(MS或SSR)标记,对中国东北区狍的遗传结构和遗传联系进行了分析。主要研究结果如下:
1.本研究对12个狍样本mtDNAD-loop区部分序列进行测定,获得了614bp的序列片断,在可比较的562bp序列中,存在40个变异位点,多态位点的比例为7.12%,其中,20个是单一多态位点,20个是简约化信息位点,转换38个,颠换2个。此外,还存在2个未测出位点,3个插入/缺失位点。共检测到12种单倍型,单倍型间的序列差异平均为2.00%。所测定的东北狍核苷酸多样度(π)比较低,仅有0.0204。AMOVA分析,有58.09%的变异来自种群内,20.58%的变异来自区系间,21.33%的变异来自区系内种群间。通过遗传距离的计算和聚类分析结果显示,3个区系的东北狍大致归于各自分组。
2.在RAMP标记分析中,从112个引物组合中筛选出16组RAMP引物用于31个狍样本分析,共检测出87条带,83条带表现出多态性,多态百分率为95.4%。每个引物扩增出3~9个明显的片断,平均5.4条扩增带。16组引物的扩增条带中有3组引物6条扩增带一致,不存在多态性,其余均产生了丰富的多态性。通过UPGMA聚类分析,得到与mtDNA控制区序列检测相似的结果,即长白山群体和大兴安岭群体均明显地归于各自分组,且遗传关系较近。
3.本研究采用微卫星标记技术,对东北狍进行遗传多样性检测。从7个白尾鹿微卫星位点和13个赤鹿微卫星位点中筛选得到5个微卫星位点,分别为:ETH3、ODOSTSH、ETH225、CSSM22和CSSM66。5个微卫星位点在31个狍基因组DNA中共得到18个等位基因,平均3.6个。其中ETH3位点最少,为2个等位基因,ETH225位点最多,为5个等位基因,ODOSTSH位点为3个等位基因,CSSM22和CSSM66均为4个等位基因。同时,发现ETH225位点中的C等位基因频率非常低,仅为0.0806。根据位点的等位基因频率,计算了各个位点的基因杂合度、多态信息含量和有效等位基因数及其平均值。基因杂合度介于0.4562~0.7718之间,平均为0.6255;多态信息含量介于0.4054~0.7594之间,平均为0.6367;有效等位基因数介于1.8445~4.5012之间,平均为3.3186;表明这5个位点都具有较高的多态性,且种群具有较丰富的遗传多样性。
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