细粒棘球蚴囊液对宿主肝细胞MAPK信号通路及细胞周期的影响

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目的:探讨细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus, Eg)囊液(Hydatid cyst fluid,HCF)对宿主肝细胞MAPK信号通路(ERK通路)及增殖细胞核抗原PCNA,细胞周期蛋白cyclin-D1,cyclin-A,cyclin-B1,cyclin-E的表达水平的影响。方法:正常培养HpeG2细胞,囊液取自乌鲁木齐屠宰场患有囊型包虫病的绵羊肝脏,收集绵羊囊型包虫病的囊液,收集后用0.22um的滤器过滤,保存于-80℃。取HepG2细胞正常培养24小时,待细胞贴壁牢固后,换无血清培养液培养24h,将无血清培养后的细胞分为3组:对照组(无FCS组),实验组(含有囊液的无FCS培养液3.75%HCF组、7.5%HCF组、15%HCF组、30%HCF组、60%HCF组),正常组(含10%FCS),MTT法分别于培养后24h、48h、72h、96h检测细粒棘球蚴囊液对HepG2细胞毒性及细胞的增殖作用。用流式细胞仪分别在24h、48h、72h检测细胞周期。同样上述方法培养细胞后于24h、48h、72h、96h收集细胞,提取HepG2细胞蛋白保存于-80℃,Western-Blot蛋白印迹法检测p-ERK,增殖细胞核抗原PCNA,细胞周期蛋白cyclin-D1,cyclin-A,cyclin-B1,cyclin-E的表达水平。结果:MTT检测结果显示:在48h,72h和96h,15%,30%和60%HCF组与无FCS组相比有促进HepG2细胞增殖的作用,MTT在48h检测结果显示15%,30%和60%HCF组与无FCS组相比(0.317±0.057VS0.229±0.066)、(0.532±0.041VS0.229±0.066)、(0.600±0.043VS0.229±0.066),在72h15%,30%和60%HCF组与无FCS组相比(0.436±0.009VS0.236±0.034)、(0.673±0.070VS0.236±0.034)、(0.834±0.082VS0.236±0.034),在96h15%,30%和60%HCF组与无FCS组相比(0.473±0.003VS0.182±0.045)、(0.771±0.030VS0.182±0.045)、(0.834±0.082VS1.008±0.027),差异具有明显统计学意义(P<0.05)。流式检测结果显示:在24h,48h,72h,15%HCF组细胞S期比例分别为无FCS组的1.64倍,1.3倍和0.83倍,30%HCF组分别为无FCS组的1.64倍,0.81倍和0.38倍。Western-Blot检测结果显示:15%、30%HCF组p-ERK与无FCS组相比分别在48h、24h高表达(P<0.05),PCNA分别在48h、72h高表达(P<0.05),cyclin-D1分别在24h高表达(P<0.05),cyclin-A分别在48h、72h高表达(P<0.05),cyclin-B1分别在48h、72h高表达(P<0.05),15%HCF组cyclin-E在72h高表达(P<0.05)。结论:细粒棘球蚴囊液对体外培养HepG2细胞无毒害作用,对其增值有一定的促进作用。
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