Eg5蛋白及其靶向抑制剂S-Trityl-L-Cysteine在神经母细胞瘤中表达及功能研究

来源 :上海交通大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jiangxueying0518
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目的:我们旨在研究驱动蛋白Eg5在神经母细胞瘤中表达及其靶向抑制剂S-Trityl-L-Cysteine(STLC)对神经母细胞瘤不同细胞的诱导功能作用。方法:通过免疫荧光及western blot、流式细胞术检测Eg5蛋白在神经母细胞瘤(组织及细胞)中的表达水平;通过相差显微镜观察STLC对细胞形态学影响;采用CCK-8法检测STLC对细胞增殖影响;流式细胞术检测STLC对细胞周期的影响;以流式细胞术及western blot检测经STLC诱导后细胞蛋白表达变化;并经DAPI实验观察STLC对细胞核形态变化的影响;最后,通过采用FISH法检测STLC对原癌基因MYCN扩增的影响,免疫荧光法观察纺锤丝变化等实验,初步研究诱导机制。结果:1.通过免疫荧光及western blot、流式细胞术等实验显示Eg5蛋白在神经母细胞瘤组织及细胞株中稳定表达。2.以Eg5蛋白靶向抑制剂对不同神经母细胞瘤细胞诱导后,细胞胞体形态增大,突出于水平面,细胞核增大,细胞增殖抑制明显;CCK-8细胞凋亡检测见细胞增殖抑制明显;流式细胞仪检测示在STLC诱导后,细胞凋亡增多。细胞周期抑制于G2/M,细胞核分裂停止;western blot、流式细胞术检测可见在STLC诱导之后,Eg5蛋白表达减少;DAPI实验显示细胞核增大明显,后期出现核碎裂等细胞凋亡现象;FISH检测见MYCN基因扩增未见明显变化。结论:神经母细胞瘤组织及细胞中均稳定表达Eg5蛋白,其靶向抑制剂S-Trityl-L-Cysteine(STLC)通过抑制Eg5功能,影响神经母细胞瘤细胞的分裂及增殖,从而促进细胞凋亡。结果提示Eg5有望作为神经母细胞瘤分子治疗的靶点。
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