[目的]肺癌是目前国内癌症相关死亡的主要原因之一,严重威胁着人类的健康,给社会造成巨大的危害。丹参酮ⅡA是从中药丹参中提取的主要活性成份,具有抗肿瘤等多种药理作用并且毒副作用较小,然而,丹参酮ⅡA在治疗非小细胞肺癌方面的作用机理暂未完全阐明。对于晚期肺癌患者,分子靶向治疗是一种较好的治疗手段,但传统的靶向药物吉非替尼在长期应用后会产生耐药性,导致治疗失败。因此寻找安全有效的新治疗方案显得尤为重要。阿帕替尼是治疗化疗难治性胃癌的传统药物,通过竞争性结合细胞内VEGFR-2的ATP结合位点,阻断下游信号传导,从而抑制肿瘤新血管的生成。近年来临床试验的结果表明阿帕替尼对于非小细胞肺癌的客观疗效也较为明显。本文以人非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)A549细胞株和H1299细胞株作为研究材料,通过比较分子靶向药物阿帕替尼、丹参酮ⅡA单独、联合及序贯用药对这两种细胞株细胞形态、增殖的抑制、促进其凋亡和对凋亡蛋白表达水平的影响,初步探讨相关的作用机制,为临床应用丹参酮ⅡA治疗肺癌及阿帕替尼与丹参酮ⅡA联合用药提供初步理论依据,为活血化瘀类中药的临床应用奠定基础。[方法]实验一:阿帕替尼、丹参酮ⅡA单药、联合及序贯用药对A549细胞及H1299细胞形态及细胞活力研究:设置阿帕替尼、丹参酮ⅡA终浓度为:0 μM、5 u M、10μM、20 uM、40μM和80μM,每组设置5个复孔,将接种好的96孔板放置在37℃ 5%C02的培养箱内分别培养48h后进行CCK8检测。检测单药组、联合组及序贯组细胞活力。实验二:流式细胞仪检测药物处理后A549和H1299细胞凋亡情况:培养A549细胞及H1299细胞,并药物干预,使用Annexin FITC/PI双染细胞后按照试剂盒说明检测凋亡率。每种细胞分为6组,依次为阴性对照组,阿帕替尼组,丹参酮ⅡA组,联合用药组,丹参酮IIA序贯阿帕替尼组,阿帕替尼序贯丹参酮ⅡA组。实验三:荧光定量PCR检测药物处理后Bcl-2、Bax m RNA水平变化:培养A549细胞及H1 299细胞,并药物干预,提取RNA后合成cDNA,进行荧光定量PCR检测。细胞分组情况同实验二。实验四:蛋白印迹法检测药物处理后Bcl-2、Bax蛋白水平变化:培养A549细胞及H1299细胞,并药物干预,提取各组总蛋白后使用BCA法检测蛋白浓度,进行SDS-PAGE电泳。细胞分组情况同实验二。实验五:检测Caspase3酶活性变化:培养A549细胞及H1299细胞,并药物干预,提取各组总蛋白后使用Bradford法检测蛋白浓度,按照反应体系反应后,检测pNA产量,从而得到Caspaise3酶活性。细胞分组情况同实验二。[结果]1.CCK8结果显示:与正常培养组相比,不同浓度的阿帕替尼单药或丹参酮ⅡA单药均能够有效抑制A549和H1299细胞增殖,呈现剂量和时间依赖性。联合用药能够进一步抑制细胞增殖,差异有统计学意义(P<0.01)。2.流式细胞检测药物处理后细胞凋亡率结果显示:联合组与单药组、序贯组相比较,联合组能够增加凋亡率,但改变用药顺序后不利于提高细胞凋亡率。其中,联合用药组对H1299细胞影响较大,差异有统计学意义(P<0.05)。3.荧光定量PCR检测药物处理后的Bax/Bcl-2比值,结果显示:联合组与单药组、序贯组相比较,联合组能够显著上调Bax,下调Bcl-2 mRNA表达水平,差异有统计学意义(P<0.05)。4.蛋白免疫印迹Western Blot检测药物处理后的凋亡蛋白表达,结果显示:联合组与单药组、序贯组相比较,联合组能够显著上调Bax,下调Bcl-2表达水平。5.药物处理后的Caspase3酶活性检测结果显示:联合组与单药组、序贯组相比较,联合组Caspase3活性升高最为明显,差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]阿帕替尼联合丹参酮ⅡA促进肺癌细胞凋亡，其机制之一可能是通过干预Bax/Bcl-2平衡,调控Caspase3途径来诱导肺癌细胞凋亡有关。阿帕替尼联合丹参酮ⅡA 可能成为未来临床治疗肺癌新的药物组合。