帕金森病(Parkinson’s disease，PD)是中枢神经系统常见的神经退化性疾病，PD的病理特点是黑质、纹状体多巴胺（Dopamine,DA）能神经元的选择性死亡、缺失，从而导致基底节神经调节功能的紊乱。病因与发病机制尚不明确,目前较流行的假说有遗传、内外环境毒素接触、氧化应激、线粒体功能异常、免疫因素、细胞凋亡等。　　1-甲基-4苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tet-rahydr-opyridine,MPTP）来源于人工合成毒品的中间产物，是一种能在多种动物身上诱发类似帕金森病症候群的神经毒素,广泛用于PD动物模型的建立。MPTP本身对DA能神经元没有毒性,但在单胺氧化酶-B（MAO-B）的作用下形成的代谢物1-甲基-4苯基吡啶离子（1-methy-4-phenylpyridinium,MPP+），则具有很强的神经毒性。MPP+被DA转运蛋白主动摄取到DA能神经元胞体内，选择性损害DA能神经元，产生PD症状。同时MPP+还能够使细胞内乳酸堆积，Ca2+平衡紊乱，一氧化氮(Nitric Oxide,NO)合成增加，这些因素均可加剧自由基的过度生成，降低细胞对自由基损伤的抵抗能力，最终导致DA能神经元变性、死亡。　　红景天苷（Salidroside）是藏药红景天最有效的活性成分之一，具有广泛的药理学特性，如抗氧化、抗衰老、抗缺氧，抗癌等作用。近年来发现红景天苷具有很好的神经元保护作用，有研究表明红景天苷对谷氨酸和缺氧、低血糖诱导的神经元损伤具有保护作用，还有报道指出红景天苷对过氧化氢损伤的SH-SY5Y细胞具有保护作用，然而红景天苷对MPP+损伤的DA神经元是否具有保护作用不清楚，本实验的目的是建立PD的细胞模型，观察红景天苷对MPP+诱导的具有DA神经元特性的PC12细胞凋亡的保护作用，并通过检测细胞内的NO、一氧化氮合酶（Nitric Oxide Synthase，NOS）、线粒体膜电位（Mitochondrial Membrane Potential,MMP）、Ca2+等的变化来探讨其具体保护机制。　　1.研究目的与内容　　研究目标：　　建立MPP+诱导PC12细胞凋亡的PD模型，通过测定一系列的生化指标，探讨红景天苷的抗凋亡作用及其可能的机制，为PD的防治提供一些实验依据。　　研究内容：　　（1）建立PD细胞凋亡模型。　　（2）检测各组细胞凋亡情况。　　（3）筛选红景天苷对抗MPP+的有效浓度。　　（4）初步探讨红景天苷发挥保护作用的可能机制：NO信号转导通路。　　2.实验方法　　2.1、以传代培养的PC12细胞作为研究对象，并通过神经毒素MPP+建立细胞凋亡模型，设立正常对照组、MPP+处理组、红景天苷单独处理组、红景天苷（不同浓度）+MPP+处理组。　　2.2、MTT比色法检测细胞的存活率；Hoechst33258染色观察细胞及细胞核形态学变化；流式细胞仪测定细胞凋亡。　　2.3、NO的检测，MMP的检测、Ca2+的检测、ONOO-的检测和NOS的检测。　　2.4、NOS抑制剂组（L-NMMA）+MPP+处理组，通过MTT观察细胞存活率。　　3.实验结果　　3.1、PC12细胞经不同浓度（100-600μMmol/L）的MPP+处理12、24、36和48小时后细胞存活率明显下降，具有时间和剂量依赖性；时间越长,剂量越大，细胞存活率越低，当500μmol/L的MPP+作用于PC12细胞24h,细胞活力为(53±1.5)％,与正常对照组相比较P<0.05。故选定500μmol/L的MPP+作用于PC12细胞24h为阳性对照组。　　3.2、与MPP+组相比较,不同浓度的红景天苷（10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L）预处理可增加细胞存活率（P<0.05）;Hoechs33258染色细胞核浓缩明显减少，流式细胞仪检测凋亡的细胞明显减少。　　3.3、Western blot检测发现，与正常PC12细胞组相比较，MPP+处理组NOS含量明显增加，而经红景天苷预处理后细胞内NOS相比较显著降低。　　3.4、流式细胞仪检测发现，MPP+处理组NO含量显著增加，线粒体膜电位减少，钙离子内流增加，3-NT显著减增加，而经红景天苷预处理后，NO含量显著降低，MMP在一定程度内恢复，钙离子内流减少，3-NT减少。　　3.5、使用NOS抑制剂L-NMMA后，与MPP+处理组相比较，细胞存活力明显增加。　　4.小结　　4.1、红景天苷可剂量依赖性的对抗MPP+诱导的PC12细胞凋亡。　　4.2、红景天苷可能通过抑制NO的产生，来对抗MPP+诱导的PC12细胞凋亡。