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研究背景：大量的流行病学调查显示，乙肝病毒（HBV）的慢性感染与肝细胞癌的发生有密切的关系，HBV慢性感染是肝细胞癌发生的主要危险因素之一，然而，HBV引起肝癌的机制尚不是十分清楚，随着对肝细胞癌和HBV研究的不断深入，许多学者发现HBV中的X基因及其表达产物HBX蛋白在HBV相关性肝细胞癌的形成中起重要的作用。HBV基因组由4个开放读码框（ORF）组成，X基因是其中最小的一个ORF，它编码的HBX蛋白由145-154个氨基酸组成，分子量约为17kDa，HBX蛋白是一种多功能的调节蛋白，参与调节细胞的增殖与凋亡、细胞周期、基因转录和细胞信号转导等方面，从而作用于肝细胞癌的发生发展。肝癌细胞的无限增殖是肝癌难以控制的主要原因之一，而端粒酶的激活是细胞无限增殖的的基础。研究HBX蛋白对正常肝细胞的转化作用及其对端粒酶活性的影响具有重要的意义，可能为基于端粒酶的肝癌治疗提供新的思路。目的：观察乙型肝炎病毒X蛋白（HBX蛋白）对L02肝细胞的形态及增殖能力的影响，以及HBX蛋白对L02细胞端粒酶逆转录酶（hTERT）mRNA的表达、端粒酶活性的影响。方法：1.体外培养人正常肝细胞L02；2.构建PEGFP-N1-HBX质粒；3.脂质体LipofectamineTM2000介导PEGFP-N1-HBX质粒、PEGFP-N1质粒稳定转染L02细胞；4.倒置荧光显微镜观察稳定转染后细胞中EGFP的表达；5.Westernblotting检测稳定转染后L02细胞中HBX蛋白的表达；6.电子显微镜观察稳定转染后L02细胞的形态变化；7.MTT法检测HBX蛋白对L02细胞增殖速度的影响；8.RT-PCR法检测HBX蛋白对L02细胞hTERTmRNA表达的影响；9.TRAP-PCR银染法检测HBX蛋白对L02细胞端粒酶活性的影响。结果：1.成功构建了稳定表达HBVX基因的PEGFP-N1-HBX重组质粒。2.稳定转染PEGFP-N1-HBX质粒和PEGFP-N1质粒的L02细胞均有EGFP荧光表达，而目的蛋白HBX蛋白仅在稳定转染PEGFP-N1-HBX质粒的L02细胞中表达。3.稳定转染PEGFP-N1-HBX质粒的L02细胞大小不一，形态明显幼稚化，有恶性变的趋势。4.稳定转染PEGFP-N1-HBX质粒的L02细胞增殖能力明显增强（P<0.05）。5.稳定转染PEGFP-N1-HBX质粒的L02细胞hTERTmRNA表达明显增加，端粒酶活性被激活。结论：稳定转染了PEGFP-N1-HBX质粒的L02细胞有目的蛋白HBX蛋白的表达，HBX蛋白可诱导正常肝细胞的恶性转化，上调细胞中hTERTmRNA的表达并激活细胞端粒酶的活性。