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研究背景：肝癌是最常见的恶性肿瘤之一,其死亡率位居肿瘤相关死亡中第三位,而我国每年因肝癌死亡人数占世界的半数以上。虽然近年来我国在肝癌的早期诊断、手术治疗及肝脏移植方面取得了举世瞩目的成就,但依然存在复发率高,5年生存率低等诸多问题。所以进一步深入研究肝癌发生的病理机制,寻找有效的治疗途径依然是当务之急。Klotho基因是Kuro-o等人于1997年发现的与人类衰老密切相关的基因。发生这一基因缺陷表达的小鼠表现为生命期短,并有明显的与人类衰老相关的一系列表现。近年来有不少研究发现klotho在一些恶性肿瘤中起着抑制肿瘤增长的作用,其中就包括肝癌。已有报道显示,过表达klotho能够抑制癌细胞的增殖、迁移,诱导其凋亡及自噬,而其发生机制可能与IGF-1受体磷酸化和其下游信号通路ERK和AKT信号的活化有关。但尚未见有研究显示klotho在正常肝细胞中的作用。在这里,我们通过构建siRNA干扰klotho在细胞内的表达,进而研究它对正常肝细胞及肝癌细胞的生存期、肝癌相关基因表达的影响,探索klotho、 IGFIR信号通路在调控细胞生存与衰老及肿瘤发生中的作用及其机制。研究目的：1.构建klotho特异的小干扰RNA (siRNA)及无关序列对照siRNA2.用siRNA转染正常人肝细胞系L02及人肝癌细胞系HepG2细胞,检测细胞增殖、肝癌相关基因表达及IGF1R信号通路中相关分子的表达与磷酸化水平的改变。从而阐述klotho在调控正常细胞与癌细胞生存及肿瘤发生中的作用及机制。研究方法:在这一研究中,我们构建了klotho特异的siRNA于体外干扰klotho的表达,并用其转染正常人肝细胞系L02细胞和人肝癌细胞系HepG2细胞。用细胞增殖CCK-8试验来检测细胞的增殖能力；用qPCR试验来检测肝癌相关基因的表达；用Western blot试验来检测siRNA的干扰效果及细胞中IGF1R信号通路相关分子的表达和磷酸化水平。研究结果：结果显示,klotho在肝癌细胞中的表达明显低于正常肝细胞,而IGF-1受体的磷酸化水平则相反。干扰klotho在细胞内的表达后,癌细胞的增殖水平有明显升高,而正常肝细胞的增殖水平下降。qPCR结果显示干扰klotho的表达后,正常肝细胞中肝癌相关基因的表达有明显的上升趋势。Western blot结果显示,在肝癌细胞中IGF1R信号通路相关分子如IGF1R、AKT、ERK的磷酸化水平与klotho的表达呈反向相关,而在正常肝细胞中却成正相关。结论：Klotho能够促进正常肝细胞的增殖,抑制癌细胞的增殖。Klotho基因缺陷会导致正常肝细胞内肝癌相关基因的表达增加。Klotho的作用可能是通过调控IGF1R信号通路及其下游AKT和ERK信号实现的。