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视觉发育敏感期内异常的形觉体验所造成的视力障碍称为弱视,目前临床上对成人弱视的治疗存在争议,而且其治疗效果也不理想。动物研究证实成年弱视大鼠长期应用氟西汀,可明显逆转眼优势柱的转移及促进视功能的恢复,但其作用机制尚不明确。氟西汀属于一种选择性5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)再吸收抑制剂的抗抑郁药物,它能使体内5-HT含量增加,而5-HT作为一种重要的胺类神经递质,广泛分布于哺乳动物的视网膜和视皮层,其与相应受体结合可诱导长期突触可塑性和眼优势可塑性。此外,已有研究从形态学方面证实5-羟色胺2C受体(5-hydroxytryptamine-2C subunit receptor,5-HT2CR)在斜视性弱视猫视皮层表达较正常猫明显下降,那么其在单眼形觉剥夺性成年弱视大鼠视皮层的情况如何,国内外相关报道较少。 目的:本课题通过建立单眼形觉剥夺性成年弱视大鼠模型,采用电生理学方法研究5-羟色胺盐酸盐和5-HT2CR阻断剂SB242084对单眼形觉剥夺成年弱视大鼠离体脑组织切片视皮层V1M区长时程增强(long-term potentiation,LTP)的影响,再次激活成年弱视大鼠视皮层突触可塑性,为成人弱视治疗提供新的理论依据。 方法:1.造模和分组:将16只未睁眼SD(Spargue-Dawley)大鼠随机分为2组:正常对照组(NC组)和单眼形觉剥夺组(MD组),每组8只。NC组大鼠不做任何处理,MD组大鼠分别行右侧眼睑缝合术,造模成功后饲养6周(≥8周龄),处死2组大鼠,冠状切取400μm厚视皮层脑组织切片并孵育于人工脑脊液(ACSF)中。根据ACSF加入不同药物,将2组视皮层切片再分为9小组:正常对照视皮层组(NC组)、剥夺眼对侧视皮层组(CC组)、剥夺眼同侧视皮层组(IC组)、剥夺眼对侧视皮层生理盐水组(CCⅠ组)、剥夺眼同侧视皮层生理盐水组(ICⅠ组)、剥夺眼对侧视皮层5-羟色胺盐酸盐组(CCⅡ组)、剥夺眼同侧视皮层5-羟色胺盐酸盐组(ICⅡ组)、剥夺眼对侧视皮层SB242084联合5-羟色胺盐酸盐组(CCⅢ组)、剥夺眼同侧视皮层SB242084联合5-羟色胺盐酸盐组(ICⅢ组)。NC组、CC组和IC组均不加任何药物,CCⅠ组和ICⅠ组均加入生理盐水,CCⅡ组和ICⅡ组均加入5-羟色胺盐酸盐(10μmol/L),CCⅢ组和ICⅢ组均加入SB242084(10μmol/L)和5-羟色胺盐酸盐(10μmol/L)。 2.电生理实验:采用细胞外场电位记录法对上述视皮层切片进行电生理学实验,记录离体脑组织切片视皮层V1M区LTP。 3.数据分析:选取fPSP下行波振幅的10%和50%计算fPSP斜率(fPSP slope),设定基础刺激(10min)fPSP斜率为100%,采用SPSS21.0软件对HFS后(51~60min)fPSP斜率的变化进行分析,统计结果以(x)±s表达。NC组、CC组、IC组采用单因素方差分析样本均数间的多重比较,CCⅠ组和CCⅡ组、ICⅠ组和ICⅡ组、CCⅡ组和CCⅢ组、ICⅡ组和ICⅢ组组间比较均采用独立样本t检验,P<0.05为差异有统计学意义。 结果:1.HFS诱导的正常对照视皮层组和单眼形觉剥夺双侧视皮层组fPSP斜率(%)比较:NC组为(198.1±13.5)%,IC组为(144.5±2.9)%,CC组为(106.3±8.3)%,3组间差异有统计学意义(F=197.594,P<0.001),且NC组最高,CC组最低,差异有统计学意义(P<0.001)。 2.5-羟色胺盐酸盐对单眼形觉剥夺组双侧视皮层fPSP斜率(%)的影响:CCⅠ组为(106.3±8.3)%,CCⅡ组为(157.1±9.7)%,CCⅡ组高于CCⅠ组,差异有统计学意义(t=-10.833,P<0.001);ICⅠ组为(144.5±2.9)%,ICⅡ组为(192.2±8.6)%,ICⅡ组高于ICⅠ组,差异有统计学意义(t=-10.616,P<0.001),且ICⅡ组高于CCⅡ组,差异有统计学意义(t=-6.841,P<0.001)。 3.SB242084联合5-羟色胺盐酸盐对单眼形觉剥夺组双侧视皮层fPSP斜率(%)的影响:CCⅢ组为(102.6±4.7)%,CCⅡ组为(157.1±9.7)%,CCⅢ组低于CCⅡ组,差异有统计学意义(t=11.872,P<0.001);ICⅢ组为(129.7±13.5)%,ICⅡ组为(192.2±8.6)%,ICⅢ组低于ICⅡ组,差异有统计学意义(t=9.911,P<0.001),且ICⅢ组高于CCⅢ组,差异有统计学意义(t=-3.910,P<0.05)。 结论:1.单眼形觉剥夺成年大鼠双侧视皮层fPSP斜率较正常大鼠明显降低,提示关键期行单眼形觉剥夺至成年期对大鼠双侧视皮层神经传递均起到抑制作用,并且剥夺眼对侧视皮层fPSP斜率较同侧视皮层小。 2.5-羟色胺盐酸盐能提高单眼形觉剥夺成年大鼠双侧视皮层fPSP斜率,提示5-羟色胺盐酸盐在一定程度上可恢复成年弱视大鼠视皮层神经传递,重新激活成年弱视大鼠视皮层突触可塑性,其主要通过5-HT2CR。