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实验目的 干细胞是一类具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能的细胞群体,按照组织发生学来源干细胞可分为胚胎干细胞和成体干细胞。成体干细胞是指个体发育到一定阶段甚至成体,仍存在的一小部分未成熟、未分化细胞,负责组织的更新和修复。那么干细胞为什么能具有多分化,维持未分化状态呢?其机理尚不清楚。在胚胎干细胞研究中,有人发现Oct3/4在维持其未分化状态中起重要作用。Oct3/4是POU家族的转录因子,在胚胎干细胞中表达,在分化细胞中没有表达。Bcl-2是经典的抗凋亡因子,能抑制增殖细胞的凋亡,延长非增殖细胞的存活时间。为了探讨气管干细胞多分化潜能和保持未分化状态的分子机理,本研究采用5-FU制成人支气管、大鼠气管上皮损伤修复模型,观察气管干细胞在增殖、分化过程中Oct3/4、Bcl-2表达的动态变化,探讨其表达意义。 实验材料和方法 1.制备离体大鼠气管损伤模型: 250克左右Wistar大鼠,雌雄不限（中国医科大学实验动物中心提供）,腹腔注射10%水合氯醛0.4ml/100g,无菌条件下取出气管,剪成约3mm的气管环,倒置显微镜下观察纤毛摆动良好,取一组织块作正常对照。于DMEM/F12中加入5-FU,终浓度为120mg/ml,将大鼠气管环置于其中,CO2孵箱孵育12小时,换新鲜的DMEM/F12培养液继续培养。分别于0、3、6、9、12、24、48、72小时取出一块组织固定,石蜡包埋,制成3μm厚的组织切片。另取换液后0、3、9、24、48小时的气管组织及正常气管组织,解剖显微镜下机械剥离上皮,每个样品约0.1克,放于1.5ml Eppendorf管中,-