脐血作为一种可替代的造血干细胞的来源，可重建骨髓造血及免疫，对重建患者的短期造血功能和长期造血功能具有显著作用，另外，脐血来源广泛，采集方便，所以近年来有关脐血移植的研究越来越广泛。然而，脐血的数量有限，因此，脐血干／祖细胞的高效体外扩增是一项具有很高临床应用价值的研究。 骨髓是成人造血干／祖细胞的主要发源地，其中的间充质样细胞为造血干／祖细胞的增殖和分化提供了良好的微环境，这可能与其能合成和分泌多种造血正、负调控因子(细胞因子和粘附因子)等有关。因此，目前许多实验室在体外扩增培养造血干／祖细胞时，应用骨髓基质细胞或间充质干细胞为饲养层，与造血干／祖细胞共培养，以此提高造血干／祖细胞的扩增效率。本研究从脐血中培养出类似于骨髓基质或间充质干细胞的脐血间充质干细胞，对这种细胞进行形态学观察，利用流式细胞仪对其进行表面抗原的测定，并且以其为饲养层，结合外源生长因子，建立共培养体系，体外扩增脐血造血干／祖细胞，研究来自脐血的间充质干细胞饲养层对脐血造血干／祖细胞的支持作用。同时，体外诱导脐血间充质干细胞向成软骨细胞方向分化，检测软骨细胞特有的Ⅱ型胶原mRNA表达，研究脐血间充质干细胞的分化特性。 从脐血中分离、培养出贴壁细胞，培养2周后开始形成纤维状细胞，30 d后全部铺层。全部铺层后，部分贴壁细胞利用流式细胞仪鉴定CD14阴性，CD13、CD166、CD29阳性，初步推断被鉴定的从脐血中培养出的纤维状贴壁细胞具有骨髓间充质干细胞的特性，并以此作饲养层以扩增培养脐血造血干／祖细胞。脐血间充质干细胞培养中的最适接种密度约为2×10~6个细胞／ml。 以密度为1.077g／ml的Ficoll分离液从人脐血中分离出单个核细胞(MNC)，分离的单个核细胞一半用于单个核细胞扩增培养，一半用于分选CD34~+细胞。CD34~+细胞分离采用吸附单克隆抗体—磁珠分离系统(MACS，Miltenyi Biotech，浙江大学硕士学位论文Inc.)。用以脐血贴壁细胞做饲养层加外源细胞因子所建立的共培养体系与仅用外源细胞因子的培养体系相比较，其单个核细胞和CD34+细胞扩增效率分别提高了2.09倍和2.94倍，并且前者扩增出的细胞比后者具有更高的GEMM一亡Fc形成潜能。根据脐血造血干/祖细胞生长曲线，在培养后的14天，达到扩增数的最高峰，以后将逐渐下降。 用TGF一日1和维生素C诱导体外脐血间充质干细胞两周后，甲苯胺蓝染色显示诱导细胞的细胞浆内含有大量异染颗粒;用RT一PCR证明MSCs表达成软骨细胞特异的H型前胶原mRNA，说明培养的细胞具有向软骨细胞分化的潜能，由此进一步证实从脐血中培养出的贴壁细胞具有骨髓间充质干细胞的特性，故称脐血间充质干细胞。