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目的: 探讨延边地区朝鲜族、汉族人群之间冠心病的危险因素、病变程度,以及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)/一氧化氮(NO)在患者血浆中水平差异的分子机制。 方法: (1)将入选患者按民族分为朝鲜族及汉族两组,统计各组患者的临床资料,包括年龄、体质指数(BMI)、既往史、吸烟史、乙醇摄入量等,以及冠状动脉造影结果;酶联免疫吸附法(ELISA)测定血浆NO、eNOS、神经型一氧化氮合酶(nNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平。(2)根据患者乙醇摄入差异和血浆eNOS/NO水平的差异,进行细胞实验,探讨乙醇对eNOS/NO水平的影响及机制。分离并培养人脐带静脉内皮细胞(HUVECs),蛋白免疫印迹(WesternBlotting)明确乙醇降低HUVECs eNOS蛋白表达的浓度及时间关系;在该浓度时间条件下观察细胞形态,并进行MTS实验检测细胞增殖,以及细胞流式检测细胞凋亡;将后续实验分为对照组(Control)、乙醇组(浓度设定为200mM)、Tiron(活性氧清除剂)组、Tiron+乙醇组、GKT137831(NOX1/NOX4抑制剂)组、GKT137831+乙醇组、SC-79(Akt激活剂)组、SC79+乙醇组,通过Western Blotting检测Akt、eNOS蛋白的表达以及磷酸化蛋白p-eNOS Ser1177水平,探究乙醇降低eNOS表达的机制;Griess法测定各组细胞加入eNOS抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)前后NO的浓度。 结果: (1)两组患者间的一般资料比较,结果显示,在慢性饮酒量上,朝鲜族患者明显高于汉族患者(p<0.05);两组患者冠状动脉造影结果显示,朝鲜族患者多支病变所占比例明显高于汉族患者(p<0.05);血浆一氧化氮合酶(NOS)和NO浓度检测结果显示,朝鲜族患者血浆eNOS浓度显著低于汉族患者(p<0.05),NO浓度显著低于汉族患者(p<0.05),而血浆iNOS、nNOS浓度均无显著差异(p>0.05)。(2)细胞实验中,与对照组相比,1h、6h条件下,各处理浓度乙醇对HUVECs的eNOS蛋白表达无显著差异(p>0.05),24h、200mM乙醇浓度培养条件下,HUVECs的eNOS蛋白表达显著降低(p<0.01),而48h、50mM、100mM和200mM乙醇浓度培养条件下,HUVECs的eNOS蛋白表达显著降低(p<0.05,p<0.01和p<0.01);与对照组相比,200mM乙醇浓度培养24h下,细胞基本形态无明显改变,不影响HUVECs增殖(p>0.05),对细胞无明显毒性作用(p>0.05);Tiron、GKT137831的预处理并未影响乙醇减少eNOS蛋白的表达的作用(p<0.05);SC-79预处理细胞后抑制了乙醇减少eNOS总蛋白的表达(p<0.01)以及磷酸化蛋白p-eNOS Ser1177水平(p<0.01);未加入L-NAME情况下,与Control组相比,乙醇组NO生成明显减少(p<0.01),而SC-79组和SC-79+乙醇组的NO生成无明显差异(p>0.05),且均比乙醇组高。而在加入L-NAME情况下,Control组、SC-79组和SC-79+乙醇组均比未加入L-NAME时NO产量明显减少(p<0.05、p<0.01和p<0.05);乙醇组NO产量与未加入L-NAME时无明显差异(p>0.05)。 结论: 1.朝鲜族冠心病病变程度重于汉族患者,且可能与朝鲜族乙醇摄入量高密切相关; 2.乙醇通过下调Akt/eNOS途径,降低HUVECs的eNOS源性NO释放,可能为饮酒对冠心病产生有害影响提供新的理论依据。