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球兰属(Hoya R.Br.)为萝藦科(Asclepiadaceae)多年生常绿蔓性草本植物,具有很高的观赏价值和药用价值。中国是球兰属植物的主要分布区之一,主要分布于南方热带和亚热带地区。目前国内外关于球兰的研究多集中在组织培养、药学价值及植物分类等方面,而对不同球兰的内生真菌多样性特点及系统发育等方面的研究尚未见报道。本研究以采集自海南省昌江县和乐东县的Hoya sp.1,与采集自海口市和乐东县的Hoya sp.2为实验材料,其样品编码分别为BWA、JFA、HYS和JFS,首次采用传统分离培养方法和分子生物学方法对其叶片组织内生真菌类群的群落结构、多样性特点及分子系统发育关系等进行了分析与对比,得到的主要结果与结论如下:(1)采用传统分离培养方法从不同球兰的叶片组织中共计分离到205株可培养内生真菌,并划分为31个分类单元。其中,从BWA球兰中分离到60株内生真菌,划分为14个分类单元,鉴定属于子囊菌门(Ascomycota,98.33%)和担子菌门(Basidiomycota,1.67%)的粪壳菌纲(Sordariomycetes,71.67%)、座囊菌纲(Dothideomycetes,26.67%)和伞菌纲(Agaricomycetes,1.67%),除其中1个分类单元只能鉴定到粪壳菌纲外,其它的分类单元分属于7个目8个科9个属;从HYS球兰中分离到42株内生真菌,划分为7个分类单元,鉴定属于Ascomycota门Sordariomycetes纲的2个目2个科2个属;从JFA球兰中分离到45株内生真菌,划分为11个分类单元,鉴定属于Ascomycota门Sordariomycetes纲(77.78%)和Dothideomycetes纲(22.22%)的5个目8个科8个属;从JFS球兰中分离到58株内生真菌,划分为8个分类单元,鉴定属于Ascomycota门Sordariomycetes纲(74.14%)和Dothideomycetes纲(25.86%)的5个目5个科5个属。(2)采用分子克隆检测方法构建不同球兰的叶片组织的ITS基因克隆库,从中共计随机筛选出323条内生真菌克隆序列,聚类为121个OTU。其中,从BWA球兰中得到78条内生真菌克隆序列,聚类为27个OTU,鉴定属于Ascomycota门(91.02%)和Basidiomycota门(8.98%),除5个OTU只能鉴定到门或者纲外,其它的22个OTU分属于7个纲11个目;从HYS球兰中得到94条内生真菌克隆序列,聚类为35个OTU,鉴定属于Ascomycota门(98.94%)和Basidiomycota门(1.06%),除3个OTU只能鉴定到纲外,其它的32个OTU分属于4个纲5个目;从JFA球兰中得到68条内生真菌克隆序列,聚类为23个OTU,鉴定属于Ascomycota门(98.53%)和Basidiomycota门(1.47%),除5个OTU只能鉴定到门或者纲外,其它的18个OTU分属于4个纲7个目;从JFS球兰中得到83条内生真菌克隆序列,聚类为48个OTU,鉴定属于Ascomycota门(79.52%)和Basidiomycota门(20.48%),除22个OTU只能鉴定到门或者纲外,其它的26个OTU分属于8个纲12个目。(3)采用传统分离培养方法得到内生真菌多样性指数,在相同种(Species)不同生境的球兰中,BWA球兰大于JFA球兰,HYS球兰大于JFS球兰,在相同生境不同种(Species)的球兰中,JFA球兰大于JFS球兰,而分子克隆检测方法得到结果刚好与之相反;传统分离培养方法得到内生真菌多样性指数普遍低于分子克隆检测方法;两种方法检测到的内生真菌类群组成差别明显,有些类群不能在两种方法中同时检测到。(4)通过真菌形态学特征比较、ITS基因片段分子系统发育分析及查阅相关文献资料,初步判断1株编号为BWAJL49的真菌为Ascomycotion门Sordariomycetes纲的一个新种;初步判断2株以编号JFSJL16菌株为代表的真菌是Endomelanconiopsis microspora,为一个中国新记录种。本研究结果有助于较为全面地了解球兰属植物内生真菌的类群组成和多样性特点,为球兰植物内生真菌这一重要资源的认识和利用提供了理论依据和资源基础,具有一定的理论和实践意义。