论文部分内容阅读
目的:探讨CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)在索拉菲尼(sorafenib,SOR)联合辛二酰苯胺异羟肟酸(suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)诱导人肝癌细胞MHCC97L、Hep G2凋亡中的作用及机制研究。方法:给予不同浓度的SOR(0.5、1、3、6、12、25、50μmol/L)、SAHA(0.5、1、3、6、12、25、50μmol/L)以及SOR联合SAHA(剂量同前)处理MHCC97L、Hep G2细胞48 h,采用CCK-8法检测SOR、SAHA及两药联合对MHCC97L、Hep G2细胞增殖的抑制作用;根据CCK-8实验结果,后续实验中选择12μmol/L SOR、6μmol/L SAHA以及12μmol/L SOR联合6μmol/L SAHA处理细胞。随后,设对照组、12μmol/L SOR组、6μmol/L SAHA组以及两药联合组(12μmol/L SOR+6μmol/L SAHA)处理细胞48 h,采用流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡的变化;Western blot法检测MHCC97L、Hep G2细胞中内质网应激相关分子葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)、蛋白激酶R样内质网激酶(PKR-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)和p-PERK、活化转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)及CHOP蛋白表达的变化。为进一步明确CHOP在SOR联合SAHA诱导人肝癌细胞凋亡中的作用,本研究采用CHOP si RNA沉默CHOP基因后,采用流式细胞术观察SOR联合SAHA对MHCC97L、Hep G2细胞凋亡的影响。结果:与对照组比较,不同浓度的SOR和SAHA均可使MHCC97L、Hep G2细胞增殖率显著降低,这种抑制作用呈浓度依赖性,且两药联合对肝癌细胞的抑制作用更加显著(P<0.05);细胞周期结果显示细胞增殖均被阻滞在G1期;流式细胞术检测发现12μmol/L SOR联合6μmol/L SAHA可显著促进MHCC97L、Hep G2细胞凋亡,凋亡率分别为(37.88±7.68)%和(23.20±1.06)%,明显高于对照组(0.80±0.87)%、(5.23±0.27)%和单独使用SOR组(13.18±1.08)%、(13.57±1.12)%及SAHA组(12.18±1.84)%、(10.85±0.86)%(P<0.01);同时Western blot结果显示SOR联合SAHA可显著上调MHCC97L、Hep G2细胞中GRP78、p-PERK、ATF4和CHOP的表达;通过CHOP si RNA沉默CHOP基因后发现能显著抑制两药联合诱导的细胞凋亡。结论:SOR联合SAHA可显著抑制MHCC97L、Hep G2肝癌细胞的增殖并诱导细胞凋亡,其机制可能与上调内质网应激凋亡通路中CHOP的表达有关。