【摘 要】
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补体系统(complement system)是先天性免疫系统的非常重要的组成部分,补体系统的激活有三条主要的途径:经典途径(classical pathway)、替代途径(alternativepathway)和凝集素途径(l
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补体系统(complement system)是先天性免疫系统的非常重要的组成部分,补体系统的激活有三条主要的途径:经典途径(classical pathway)、替代途径(alternativepathway)和凝集素途径(lectinpathway)。其中,凝集素途径被认为有可能是补体激活途径中比较古老的一条途径,因为己经发现无脊椎动物中存在甘露糖结合凝集素(mannose-binding lectin,MBL)和甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶(MBL-associated serine proteases, MASPs)。MBL是一种模式识别分子,可以与甘露糖结合以及调理带甘露糖的病原体,激活补体系统。本文采用mannan-agarose亲和层析的方法从斑马鱼4?8细胞的胚胎中纯化出了甘露糖结合凝集素,并对其功能进行了初步探索。细菌结合实验表明,从胚胎中纯化的MBL能与革兰氏阴性菌大肠杆菌〈Escherichiacoli)和革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌、Staphylococcus aureus)结合。促吞唆实验发现,纯化出的斑马鱼MBL能促进鲤鱼巨唆细胞对大肠杆菌、E.coIi)和金黄色葡萄球菌、S.aureus)的吞唆作用。胚胎勻楽能够促进鲤鱼巨唆细胞对大肠杆菌、E.coU)和金黄色葡萄球菌、S.aureus、的吞噬作用,而向胚胎匀浆中加入MBL抗体后,胚胎匀浆的促吞噬作用减弱。显微注射实验表明:向胚胎中注射MBL抗体后,胚胎在受到斑马鱼的主要致病菌嗜水气单胞菌LAeromonas hydrophila)感染时死亡率显著升高;向胚胎中注射纯化的MBL后,胚胎对嗜水气单胞菌的抵抗能力增强;同时注射MBL和MBL抗体时,这种作用被显著地抑制。这说明MBL对发育中的胚胎具有保护作用。最后,本文采用免疫印迹(Westenr-blot)的方法证明斑马鱼胚胎中存在MASP。这些结果说明,斑马鱼中MBL参与早期胚胎免疫保护作用,它可能通过凝集素途径发挥作用。
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