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我国古书中有关梅花鹿的记载很多,祖先将它视为吉祥之物,而且作为药用,资源丰富,一直是入药的上品。前期研究,从梅花鹿胎盘提取得到鹿胎免疫调节因子(CPIRF),是指分子量在10 kDa以下的天然多肽。该多肽具有抑制肿瘤生长,抗疲劳,抗氧化等生物活性。但是CPIRF仅占梅花鹿胎盘的一小部分,仍有大量成分没有被利用。为了避免梅花鹿胎盘剩余资源的浪费,本研究以提取CPIRF后的上清液(SDPH)为原料,明确其成分的基础上,对其酶解工艺进行了优化,并对梅花鹿胎盘双酶酶解液(DPDS)的活性与安全性进行了评价。研究结果:(1):SDPH成分分析:利用生化试验方法与高效液相色谱(HPLC)法测定SDPH主要成分,多肽类物质含量最多,为4.08±0.20 mg/ml;其次,多糖类为2.66±0.14 mg/ml;而净核酸含量为0.11±0.03 mg/ml;雌激素中,炔雌醇的含量较丰富,为50.59±0.18μg/ml,己烯雌酚仅为0.31±0.02μg/ml。(2):SDPH酶解条件优化:以酶解温度,酶解时间,pH值,酶活力为单因素,正交试验确定DPDS酶解最优条件。结果显示:胃蛋白酶水解条件:酶活比5000 U,pH 2.5,40℃,水解3.5 h,不灭酶活,直接调节pH 7.0,加入木瓜蛋白酶,酶活比2500 U,53℃,水解2.5 h,DPDS水解度46.30%。电泳分析DPDS多肽,与未水解的SDPH比较,出现了小于2 KDa的弥散多肽条带。DPDS紫外扫描体现了典型多肽吸收峰。(3):DPDS生物活性和安全性评价:MTT法检测抑瘤活性,DPDS对于胃癌细胞(823)和宫颈癌细胞(Hela)具有良好体外抑瘤作用,且对于胃癌细胞(823)作用优于宫颈癌细胞(Hela)。增强免疫活性试验中,鼠脾淋巴细胞增殖率较为明显;灌胃后小鼠巨噬细胞的吞噬能力明显增强。体外抗氧化试验中,DPPH自由基的清除率与总还原力均随着DPDS蛋白浓度的增高而增大。DPDS处理的小鼠的总SOD活力相对空白组具有显著提高,MDA的含量则明显低于对照组。而抗疲劳试验显示DPDS组小鼠负重游泳时间,肝糖原含量均有所提高,而对应的血清尿素含量则下调。安全性评价:小鼠微核试验的外周血与股骨髓中形成的微核,与阴性对照组比较,DPDS组并无显著性的差异;精子致畸试验中DPDS组的致畸率与阴性对照组无显著性差异,并且组间亦无显著差异,DPDS不会对小鼠精子产生毒害作用;毒性LD50试验表明DPDS的LD50大于8 g/kg。本研究针对更加合理地开发利用梅花鹿胎盘问题,优化了 SDPH的酶解工艺。充分利用了梅花鹿胎盘剩余资源,不仅提高了梅花鹿胎盘的生物利用率和功能,实现了梅花鹿胎盘的高附加值利用。