谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione Peroxidase,简称GSH-Px或GPX）,是1957年由Mills在牛红细胞中发现的,近年来人们又在植物中检测到了该酶,它是一种含硒酶。在GSH作为氢供体的条件下,GSH-Px可清除有机氢过氧化物、细胞呼吸代谢产生的羟自由基和过氧化物,从而使细胞能维持正常的生理生化功能,故有防止畸变、预防衰老及参与前列腺素合成等重要病理或生理作用,并引起了人们的关注。已有不少从人、动物、微生物体中分离纯化出GSH-Px的报道,而从植物体中分离纯化GSH-Px的报道却极少。如果能从自然界丰富的植物资源中寻找到多种来源的GSH-Px,并分离纯化,将为该酶的开发研究和应用提供新的资源和途径。 采用测定GSH-Px的间接法Ⅱ检测了大葱、蒜、洋葱、姜、银杏老叶和新叶以及草珊瑚中的酶活性。其中大葱中GSH-Px活性最高,且大葱较易获得,不受季节限制,所以本实验选择了大葱作为GSH-Px分离纯化的材料。 大葱GSH-Px主要集中在40%～80%饱和度（NH₄）₂SO₄范围内盐析出来。GSH-Px比活力和提纯倍数随（NH₄）₂SO₄饱和度的增大而增加,在30%～50%饱和度范围内增加较快,在50%～80%饱和度范围内增加较为缓慢,在80%～100%饱和度范围内开始逐渐下降,但仍较大, 大葱粗提液经（NH₄）₂SO₄盐析和DEAE-Sepharose柱层析分离,得到了两种GSH-Px同工酶,即GSH-PxⅠ和GSH-PxⅡ。大葱粗提液比活力为15.42U/mg,经（NH₄）₂SO₄盐析后比活力为26.46U/mg,纯化倍数为1.72;GSH-PxⅠ经DEAE-Sepharose柱层析后比活力为42.12U/mg,纯化倍数为2.73;GSH-PxⅡ经DEAE-Sepharose柱层析后比活力为66.65U/mg,纯化倍数为4.32。 DEAE-Sepharose柱层析后获得的大葱GSH-Px温度曲线呈一钟罩形,符合酶促反应动力学曲线,最适温度范围为35℃～50℃。在20℃～45℃温度范围内,随着温度的升高,GSH-Px活力逐渐增大,因而反应速度也加快;当温度达到一定限度时（45℃以上）,温度升高虽然能使酶促反应速度加快,但是,过高的温度也加速了GSH-Px的酶蛋白变性,酶失活。结果是随着温度的升高,反应速度反而下降,即50℃～60℃温度范围内,GSH-Px酶活力迅速降低。 DEAE-Sepharose柱层析后获得的大葱GSH-Px最适pH范围为pH7.0～pH7.6,pH低于6.4和pH高于8.0均会使酶分子结构发生变化,酶活性降低。 DEAE-Sepharose柱层析后获得的大葱GSH-Px较适宜的贮存温度为-40℃。在同一时段,随着贮存时间的延长,各种温度条件下酶活力都有下降,在室温和4℃下贮存,酶活性下降较多,特别是一周后酶活力就有显著的变化;而在-20℃和-40℃下贮存,酶活力虽然有所降低,但变化较小。 MgCl₂、IAc和对氯苯汞甲酸（PCMB）对DEAE-Sepharose柱层析后获得的大葱GSH-Px有明显的抑制作用,而KCl和CaCl₂对大葱GSH-Px无明显的作用,LiCl、ZnSO₄、BaCl₂和