本研究旨在筛选出与人肝癌细胞特异结合的单链抗体，以期有助于肝癌的导向诊治。 首先用人的肝癌细胞HepG2（ATCC HB-8065）免疫BALB／c小鼠，从HepG2肝癌细胞免疫的BALB／c小鼠脾脏提取总RNA，设计简并引物，RT-PCR扩增小鼠抗体重、轻链可变区基因，用（Gly₄Ser）₃连接肽基因，经重叠延伸反应，在体外将V_H和V_L连接成单链抗体（single-chain Fv fragment scFv）基因，并克隆入噬菌粒载体pCANTAB5E中，经辅助噬菌体超感染，构建噬菌体单链抗体库。以HepG2细胞为抗原对抗体库进行淘选，ELISA法鉴定各单克隆与肝癌细胞的结合活性。经五轮富集筛选，获得一株与人肝癌细胞系HepG2结合特异性较高的单链抗体scFv-14。经序列分析，此基因全长723bp，编码181个氨基酸序列，通过与计算机数据库及互联网提供的已知各种抗体CDR序列比较，发现此单链抗体基因序列为与以往任何抗体序列皆不同的新的单链抗体。 为了得到可溶性的单链抗体，将重组的scFv-14转化大肠杆菌TOP10，IPTG进行诱导表达，scFv-E-tag在信号肽引导下分泌到壁膜间隙，成为可溶性的scFv-E-tag融合蛋白，可以用抗E-tag抗体来检测scFv的表达情况。诱导表达的菌液作SDS-PAGE和Western blot鉴定表明，scFv在Ecoil TOP10得到了正确表达。 为深入研究特定单链抗体（scFv）的功能，将识别HepG2细胞的单链抗体scFv-14高效表达、纯化。基因重组构建表达scFv-14的载体pET-24a，在大肠杆菌中诱导表达，金属离子螯和亲和层析法纯化，获得高纯度的活性scFv-14，纯化后活性蛋白产量可达每升培养物150mg，纯度大于90％。ELISA检测表明此纯化的scFv-14可与HepG2细胞有效结合。 本研究获得的与人肝癌细胞系HepG2结合特异性较高的单链抗体为进一步进行肝癌导向治疗研究奠定了基础。