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癌症的发生,对个人、家庭及社会都构成非常大的影响。目前,化学治疗和放射治疗是医治癌症的两个主要途径,而其中首要的方法还是化疗。化疗虽然能在一定的程度上抑制癌变细胞的生长,然而在治疗癌症的过程中,由于传统的抗肿瘤药物没有能力区分出癌变的细胞和正常的细胞,因此当药物在杀害癌细胞时也会影响正常细胞的生长,进而带来副作用。并且由于肿瘤细胞和组织具有复杂的内部结构,单一的药物医疗并没有显著的效果。因而,更多的研究者关注到了药物的靶向治疗。药物靶向输送,是基于细胞层面,将药物有目的地与肿瘤组织或细胞结合,使大量的抗癌药物集中于癌变部位,避免了对健康细胞造成伤害。另外,化疗药物通常的缺点是在水中的溶解度低、不能在体内长时间的循环以及生物利用度差等等。近年来,天然高分子透明质酸及其衍生物由于具有高亲水性、高粘弹性、易生物降解、低致敏性、良好的生物相容性以及与细胞表面特异性受体结合的能力而被认为是良好的药物载体。目的:本文将HA与难溶性的小分子硫化氢供体ADT-OH通过酯化反应合成水溶性HA-ADT,使ADT-OH的水溶性和靶向性增加,从而来提高硫化氢供体的生物利用度。方法:将茴香脑与硫磺反应,合成ADT;ADT脱甲基形成ADT-OH;最后将ADT-OH接枝到HA上,形成HA-ADT。采取1H-NMR、LCMS和DSC等方法进行了化合物结构和分子量的表征;激光粒度仪测量所制备的HA-ADT的粒径、Zeta电位和PDI;采用ELISA法考察HA-ADT的H2S释放行为;通过溶血性实验来评价HA-ADT的体外安全性。体外实验:通过MTT、EdU法来检测HA-ADT对乳腺癌细胞增殖的作用;采用划痕、迁移、侵袭和软琼脂实验检测人乳腺癌细胞经HA-ADT处理后,迁移和侵袭力的影响;通过平板克隆检测HA-ADT对乳腺癌细胞克隆能力的影响;Tunel试剂盒检测HA-ADT对人乳腺癌细胞凋亡的影响;最后,通过Western blot测定HA-ADT对凋亡蛋白、PI3K/AKT/mTOR和Ras/Raf/Mek/Erk信号通路等相关蛋白表达情况的影响。体内实验:将人乳腺癌细胞注射到裸鼠腋下检测HA-ADT对人乳腺癌细胞成瘤能力的影响;通过肿瘤组织的HE染色、Ki67和CD31的免疫组织化学染色来观察组织学形态;最后通过分析荷瘤裸鼠的体重以及脏器指数来评估HA-ADT的毒性。结果:1.从核磁图谱可以看出,我们成功合成了HA-ADT,接枝率为20%。2.HA-ADT的平均粒径为81.98 nm,PDI为0.293,电位为-28.8 mV。3.HA-ADT在48小时内释放相对稳定且持续存在。4.100、200、300μmol/L的HA-ADT溶血率分别为0.74%、1.47%、1.54%。5.MTT、EdU结果表明,HA-ADT组相较于对照组对人乳腺癌细胞增殖有显著的抑制作用。6.通过细胞划痕和细胞迁移作用来看,与对照组相比,HA-ADT组的细胞迁移能力明显减弱。7.从细胞侵袭和软琼脂实验可以看出,与对照组相比,HA-ADT对细胞侵袭能力有减弱的影响。8.平板克隆实验结果表明,HA-ADT组相较于对照组细胞的克隆能力明显降低。9.Tunel实验和凋亡蛋白水平的表达结果测定显示,与对照组比较,HA-ADT可以显著促进乳腺癌细胞的凋亡。10.Western blot结果显示,与对照相比,HA-ADT减少p-PI3K/p-AKT/p-mTOR和Ras/p-Raf/p-Mek/p-Erk蛋白的表达。11.成瘤实验表明,同对照组比较,给药HA-ADT组的裸鼠腋下肿瘤体积明显较小。12.苏木精-伊红染色结果可以看出,与对照组比较,HA-ADT组的细胞核较小,间质较多,核分裂较少,出现了较大范围内的坏死。13.从Ki67和CD31免疫组化实验结果可以看出,HA-ADT组的肿瘤组织内的细胞核数和微血管密度与对照组相比明显减少。14.裸鼠体重和脏器指数统计显示各组之间无统计学差异。结论:成功制备了HA-ADT。HA-ADT粒径分布均匀,稳定性好,缓释性好。细胞实验和动物实验表明,在相同的浓度下,HA-ADT比NaHS和GYY4137有更好的抗癌作用,同时显著降低了药物治疗的副作用。因此,HA-ADT可被视为一种具有潜在价值的新型抗肿瘤制剂。