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本论文将透明颤菌血红蛋白基因(vgb)转入红霉素产生菌——糖多孢红霉菌中,改善菌体对氧的需求,提高红霉素的产量。本文首先在TK24中验证采用的PmerR启动子和PermE*启动子能够成功启动vgb的表达,来确定vgb可能在糖多孢红霉菌中成功表达。质粒pSETl52是含有链霉菌噬菌体φC31int介导的att染色体整合位点和用于接合转移的oriT区域的载体,以质粒pSET152作为载体,构建了插入PmerR-vgb-to基因的质粒pSPU240和插入PermE*-vgb-to基因的质粒pSPU242,并通过接合转移的方法将其转入糖多孢红霉菌。
通过抗性筛选及PCR验证获得多株转化子,经过大量筛选得到两株高产菌株D4和U9,它们比出发菌株效价分别提高了15%和11%。又经培养基装量考察发现,vgb基因工程菌株在贫氧的条件下,效价比出发菌株高。同时,发现在豆油量从0.4%提高到1.2%时,D4菌株的效价最高可达6400μg/mL,与出发菌株在原培养条件下相比提高20%左右。PCR验证D4和U9分别是质粒pSPU240和pSPU242通过attp位点特异性整合到染色体上的菌株,采用CO结合差光谱法验证vgb在菌株D4中表达了具有生物活性的VHb蛋白,成功实现了vgb在糖多孢红霉菌中整合表达。经过传代后工程菌株在遗传和生产能力方面,稳定性良好,适合用于工业生产。