马BAFF与其受体的结构、性质分析及其对脂肪干细胞成脂分化的影响

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B淋巴细胞刺激因子(BAFF),TNF家族第17位成员,是B细胞存活的关键细胞因子,其特异性受体BAFF-R是BAFF介导B细胞存活的最重要受体。鉴于BAFF的特异性B细胞免疫增强活性,其在畜禽养殖、疫病防治等方面具有重要的研究和应用价值,但是马(Equus Caballus)BAFF与其受体的结构、性质研究仍未见报道。  本论文在克隆并分析马BAFF、BAFF-R结构、性质的基础上,基于对TNF家族成员生物功能多样性、脂肪组织的内分泌和免疫功能特性、以及脂肪干细胞(ASC)多向分化潜能的综合考虑,我们选择马ASC作为实验对象,进一步探讨马BAFF与ASC的关系。  论文主要实验结果如下:  1.完成马BAFF、BAFF-R的分子克隆、结构性质分析和预测,所获得的genomic DNA及cDNA序列均提交GenBank数据库。  2.原核表达、亲和层析获得His6-sBAFF和BAFF-R-Fc重组蛋白;等温滴定微量热法和免疫沉淀法证实二者体外结合;MTT结果显示BAFF-R-Fc可抑制His6-sBAFF诱发的小鼠脾脏B细胞体外存活。  3.免疫荧光证实马ASC存在BAFF及其受体的表达;实时荧光定量PCR结果表明在马ASC成脂分化过程中,BAFF及BAFF-R mRNA表达均上调;初步结果显示His6-sBAFF重组蛋白促进马ASC体外成脂分化,提示BAFF有可能参与ASC成脂分化调控。
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