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目的：乳房外Paget病(Extramammary Paget’s disease,EMPD)由Crocker于1889年首次报告。本病是一种比较少见的恶性程度较低的表皮内腺癌。好发于老年人,常见于肛门生殖区和其他大汗腺分布区。部分可继发于临近器官的肿瘤在上皮内的播散。特征是皮损呈湿疹样变和病理出现Paget:细胞,其组织学来源历来有争议。其发病的分子学机制已经成为近年来的研究热点。肿瘤细胞可以侵入真皮,或通过淋巴系统发生转移。近年来研究表明细胞周期失控是细胞增殖失控而导致癌变的重要原因。真核细胞周期是受细胞周期蛋白(cyclin)和细胞周期蛋白依赖激酶(cyclin dependent kinase, CDK)组成的蛋白复合体调控。CDI(cyclin dependent kinase inhibitor)是新发现的一类蛋白,通过与cyclin-CDK的结合从而抑制复合体的激酶活性,阻断G1期到S期的转换,抑制细胞增殖,提示CDI是抑癌基因的产物。P16是一种参与细胞周期调控的抑癌基因的产物,并且是一个重要的细胞周期调控因子,它抑制周期素依赖性激酶4(CDK4)的催化活性,使Rb蛋白没有被磷酸化而保持活性,从而阻止细胞从G期进入S期,抑制细胞的异常分裂,防止癌症的发生。当P16失活时,就会使Rb蛋白被磷酸化,细胞无控制地增殖,最终发展成为肿瘤。其功能的丧失与肿瘤的发生有着密切的关系。目前在大部分肿瘤中发现P16有缺失或突变,但突变和缺失具有肿瘤类型的倾向性,在某些肿瘤中其突变和缺失较少见。但一些研究发现在HPV16/18感染以及pRb表达阴性的宫颈癌、肺癌、头-颈鳞状细胞癌中,P16不是表现为突变或缺失,而是过度表达。CDK4即细胞周期素D依赖性激酶4,是CDK家族的成员之一,是细胞周期G1期的正调控因子。哺乳动物细胞增生及分化的调节大部分发生于细胞周期G0/G1期和/或G1/S期的转变时期,CDK4作为G1期重要的调控因子,已发现它在多种肿瘤中出现表达异常。PCNA作为DNA聚合酶的辅助蛋白直接参与细胞增殖过程中DNA的复制,其量的变化与DNA合成情况一致,其含量和表达程度反应了细胞的增殖活性,因此可以作为评价细胞增殖状态的一项指标。国内外已有人研究了部分皮肤肿瘤中P16、CDK4和PCNA的表达和意义,但迄今为止EMPD中这些指标的表达研究尚未见报道。本文旨在研究P16、CDK4和PCNA在EMPD发生发展中的作用,以及三者间的相互关系和与淋巴结转移的关系,并为临床诊断、治疗和预后判断提供新的思路和手段。方法：应用非生物素二步法免疫组织化学方法检测34例乳房外Paget病和20例来自整形外科行包皮环切术的健康男性的正常皮肤中的P16、CDK4和PCNA的表达,结合临床及病理学资料进行统计学处理分析。结果：34例EMPD患者标本中有10例呈不同程度的P16表达阳性,P16阳性表达率为29.4%,20例正常皮肤组织中P16表达均阴性,显著高于正常皮肤组织,两者之间差异有统计学意义(P<0.05)。P16的表达与淋巴结转移无关。34例]EMPD患者标本中有23例呈不同程度的CDK4表达阳性,CDK4阳性表达率为67.6%,显著高于正常皮肤组织30.0%,两者之间差异有统计学意义(P<0.05)。34例EMPD患者标本中有29例呈不同程度的PCNA表达阳性,PCNA阳性表达率为85.3%,显著高于正常皮肤组织55.0%,两者之间差异有统计学意义(P<0.05)。乳房外Paget病中PCNA和CDK4阳性表达与淋巴结转移有关(P<0.05)。PCNA和CDK4呈正相关关系(rs=0.494,P<0.05)。P16与CDK4和PCNA均无相关关系。结论：P16是一种分子质量为16KD,并与CDK4结合的蛋白质分子,参与细胞周期负调控,是重要的肿瘤抑制因子。CDK4是细胞周期G1期重要的调控分子。CDK4蛋白能够特异性地与cyclinD1结合形成复合物,可以使Rb蛋白的丝氨酸或苏氨酸残基发生磷酸化,磷酸化后的Rb蛋白可导致E2F的释放,引起一系列与G1-S转变和S期行进有关的靶分子的表达,促使细胞完成DNA复制。PCNA作为DNA聚合酶的辅助蛋白直接参与细胞增殖过程中DNA的复制,其量的变化与DNA合成情况一致,其含量和表达程度反应了细胞的增殖活性,因此可以作为评价细胞增殖状态的一项指标。乳房外Paget病组织中P16、CDK4和PCNA表达增高可能在乳房外Paget病的发生、发展中起重要作用。由于P16的表达增多并不能有效调控肿瘤细胞内不断增多E2F,故P16的高表达不能很好地抑制细胞增殖。PCNA和CDK4的过表达可能协同参与了细胞周期和调控,PCNA和CDK4在G1～S相转换处起着重要的作用,引起细胞异常增殖、分化失控,最终导致肿瘤发生,提示二者在EMPD肿瘤形成机制中可能起重要作用,并且两者的过表达与乳房外Paget病的淋巴结转移有关。