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目的：嗜铬细胞瘤是引起继发性高血压的重要原因，其发病机制目前还不完全清楚，临床上早期鉴别良、恶性肿瘤尚有困难。随着分子生物学技术的发展，发现线粒体琥珀酸脱氢酶（succinate dehydrogenase，SDH）B和D（SDHB和SDHD）基因在嗜铬细胞瘤中存在一定的突变率。我们对北京协和医院63例嗜铬细胞瘤患者进行SDHB、SDHD基因突变检测，以了解SDHB、SDHD基因突变的频率及类型，探讨SDHB、SDHD基因的遗传学改变在早期发现及诊断嗜铬细胞瘤中的意义。方法：1、选择北京协和医院内分泌科2003年11月至2006年4月期间确诊的嗜铬细胞瘤患者63例，其中肾上腺嗜铬细胞瘤41例，肾上腺外副神经节瘤22例；63例患者中有家族史的15例。选择20例健康人作为正常对照。对上述63例患者、有家族史的15例患者的22例亲属及20例对照人群分别进行SDHB、SDHD基因突变检测。2、PCR扩增SDHB、SDHD基因的各外显子区域，采用PCR-SSCP和PCR产物直接测序法，筛查嗜铬细胞瘤患者的SDHB、SDHD基因突变。结果：1、63例嗜铬细胞瘤患者中仅有2例发生SDHB基因突变，突变发生率为3.2％（2／63）。发生突变的均为散发性肾上腺外副神经节瘤患者，突变均出现在第7号外显子上。其中1例为错义突变：g.692 G＞A，导致氨基酸Arg231His；另1例为缺失移码突变：g.760delT，导致氨基酸Cys254Val，258X。上述2种突变经Medline检索均未见到相关文献报道。2、63例嗜铬细胞瘤患者中未检测到SDHD基因突变。结论：1、本研究在肾上腺外副神经节瘤患者中检测到2种新的SDHB基因突变类型，SDHB基因的突变率为3.2％，未检测到SDHD基因突变。2、检测SDHB基因突变对于早期筛查肾上腺外副神经节瘤患者可能具有一定意义。目的：嗜铬细胞瘤的发病机制尚不明了，目前认为，肿瘤的发生和一个或数个抑癌基因的失活有关。根据经典的Knudson“二次打击”理论，抑癌基因失活的方式是一条等位基因发生突变，另一条发生杂合缺失（Loss of Heterozygosity，LOH），结果导致肿瘤细胞无限制性克隆生长。文献报道SDHB、SDHD基因与嗜铬细胞瘤的发生有关。我们通过检测嗜铬细胞瘤患者1p35-p36（SDHB所属区域）、11q23（SDHD所属区域）是否发生LOH，以及是否存在LOH的频发区，探讨嗜铬细胞瘤可能的分子遗传学发病机制，并寻找鉴别嗜铬细胞瘤良恶性的分子生物学指标。方法：1、选择北京协和医院内分泌科2003年11月至2006年4月期间确诊并接受手术治疗的嗜铬细胞瘤患者40例（良性者29例，恶性者11例），进行1p35-p36、11q23 LOH的研究。2、提取上述患者肿瘤组织和外周血DNA。在SDHB（1p35-p36）、SDHD（11q23）所属区域附近选择微卫星标识位点（1p上选定4个；11q上选定5个），用32P-α-dCTP掺入，扩增肿瘤和相应外周血DNA，扩增产物经6％的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，放射自显影检测各位点有无LOH。LOH判断标准：与对照扩增产物相比，相对应的肿瘤2条等位基因条带中的1条信号消失或信号强度减弱超过50％。结果：1、40例嗜铬细胞瘤患者中，有15例检测出SDHB的LOH，1例检测出该区域的微卫星不稳定（Microsatellite instability，MSI），19例未检测到LOH或MSI，5例为无杂合信息者（Non-informative，NI），故SDHB-LOH的发生率为42.9％（15／35）。15例发生SDHB-LOH的嗜铬细胞瘤患者中，10例为肾上腺外副神经节瘤（66.7％，10／15），5例为肾上腺嗜铬细胞瘤（33.3％，5／15），肾上腺外副神经节瘤发生SDHB-LOH者显著高于肾上腺嗜铬细胞瘤（P＜0.01）。D1S3669是SDHB-LOH的频发位点。2、40例嗜铬细胞瘤患者中，有2例发生SDHD-LOH，2例存在MSI，36例未检测出LOH或MSI。SDHD-LOH的发生率为5.0％（2／40）。发生SDHD-LOH的2例患者均属恶性嗜铬细胞瘤，1例位于肝门区，另1例为腹部多发恶性嗜铬细胞瘤。发生SDHD-MSI的2例患者，1例为家族性双侧嗜铬细胞瘤术后复发，另1例为左肾上腺恶性嗜铬细胞瘤。结论：1、SDHB-LOH与肾上腺外副神经节瘤相关，因此该区域的LOH可能作为早期筛查肾上腺外副神经节瘤的分子生物学指标。2、SDHB和SDHD-LOH／MSI的联合检测可能用于早期筛查肾上腺外恶性副神经节瘤患者。目的线粒体琥珀酸脱氢酶（SDH）是三羧酸循环中的重要酶，SDH基因的遗传学改变，可使线粒体氧传感通路异常，导致组织缺氧。组织缺氧时，缺氧诱导因子（HIF）通过调节血管内皮生长因子（VEGF）表达，促进新生血管形成，后者与肿瘤的发生、侵袭和转移密切相关。本研究通过免疫组织化学方法，检测缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、HIF-2α，VEGF及VEGF受体（Flt-1、Flk-1）在正常肾上腺髓质和嗜铬细胞瘤组织中的表达，探讨上述指标在SDHB、SDHD基因不同遗传学改变的嗜铬细胞瘤患者中表达水平的差异。方法1．选取北京协和医院内分泌科2003年11月至2006年4月期间确诊并经手术病理证实的嗜铬细胞瘤患者40例（男20例，女20例）；另取8例正常肾上腺髓质组织作为对照。2．采用免疫组织化学方法，检测HIF-1α、HIF-2α，VEGF、Flt-1、Flk-1在正常肾上腺髓质及嗜铬细胞瘤组织中的表达，比较上述指标在SDHB、SDHD基因不同遗传学改变者中表达水平的差异，并分析其与肿瘤临床特点的关系。结果免疫组化结果显示：1．在正常肾上腺髓质组织中HIF-1α、HIF-2α不表达或低表达；VEGF及其受体呈低表达。2．HIF-1α、HIF-2α在嗜铬细胞瘤细胞胞核和胞浆中表达；VEGF、Flt-1、Flk-1在嗜铬细胞瘤细胞胞浆和血管内皮细胞中表达。3．发生SDHB、SDHD基因突变／LOH／MSI的嗜铬细胞瘤患者，其HIF-1α、HIF-2α、VEGF和Flt-1、Flk-1的蛋白表达均高于无SDHB、SDHD基因改变者。4．肾上腺外副神经节瘤患者，恶性、肿瘤内部发生缺血坏死的PHEO患者，其HIF-1α、HIF-2α、VEGF和Flt-1、Flk-1蛋白表达水平明显增高。结论SDHB、SDHD基因的遗传学改变，可导致线粒体氧传感通路异常，使得HIF-1α、HIF-2α，VEGF和Flt-1、Flk-1表达增加，促进肿瘤血管形成，参与嗜铬细胞瘤的发生。