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研究目的探讨胆汁酸膜受体（G Protein-Coupled Bile Acid Receptor 1,GPBAR1,TGR5）在非小细胞肺癌（Non-small cell lung cancer,NSCLC）中的表达、作用机制及其临床意义。研究方法1.利用免疫组化法检测160例NSCLC及相应癌旁肺组织中TGR5的表达,分析TGR5表达与NSCLC患者临床病理特征及预后的关系。2.采用基因干扰或过表达等手段,从体内、体外多个层面,考察TGR5对NSCLC细胞增殖、周期、凋亡、迁移和侵袭以及肿瘤生长的影响,利用Western blot技术检测TGR5对细胞周期蛋白、运动分子及基质降解酶的作用,明确TGR5调控NSCLC增殖和转移的分子机制。3.探讨TGR5对Janus激酶2/信号转导与转录激活因子3（Janus kinase2/Signal transducer and activator of transcription 3,JAK2/STAT3）信号通路的影响;采用荧光素酶（Luciferase）报告基因实验检测TGR5对STAT3的转录调控作用;考察JAK2/STAT3通路对TGR5诱导的NSCLC细胞增殖、运动及肿瘤生长的影响,探讨JAK2抑制剂在TGR5高表达肿瘤中的应用。利用免疫组化法检测同一NSCLC组织中磷酸化STAT3(p-STAT3Tyr705)的表达情况,分析TGR5与p-STAT3Tyr705表达的相关性,并进行预后生存分析。4.采用ELISA法检测NSCLC患者及健康人中的血清胆汁酸水平,分析NSCLC中胆汁酸水平与TGR5表达的相关性,并进一步通过体外实验明确胆汁酸对NSCLC细胞相关表型的影响。研究结果1.免疫组化结果显示,与癌旁组织相比,TGR5在NSCLC癌组织中表达显著升高（P<0.001）。TGR5高表达者临床分期较晚,肿瘤直径较大（P<0.05）。TGR5高表达是NSCLC患者预后不良的独立预测指标（Hazard ratio[HR]=1.967,95%CI=1.203-3.214;P=0.007）。2.TGR5可通过上调细胞周期蛋白分子的表达如cyclin D1,cyclin E1,p-Rb,c-Myc,CDK4/6等,促进NSCLC细胞增殖;敲低TGR5引起NSCLC细胞G1期阻滞,而不影响细胞凋亡。体内实验进一步证实TGR5促进裸小鼠移植瘤生长。此外,TGR5可通过调控基质降解酶MMP2、MMP9、RhoA和ROCK1的表达而促进NSCLC细胞迁移和侵袭能力。3.Western blot结果显示TGR5促进JAK2和STAT3的磷酸化水平,并可上调STAT3的转录活性。此外,JAK2/STAT3通路的活化介导了TGR5高表达促进的NSCLC细胞增殖、运动,且JAK2抑制剂明显逆转TGR5高表达诱导的肿瘤体内生长。在NSCLC组织样本中,TGR5与p-STAT3Tyr705表达呈明显正相关,两者同时高表达的NSCLC患者预后最差。4.NSCLC患者血清中的胆汁酸水平如DCA,CDCA和UDCA明显比健康人高;且胆汁酸水平与TGR5表达呈正相关。体外实验显示DCA可通过活化TGR5促进NSCLC细胞运动。研究结论1.本研究首次发现TGR5在NSCLC患者癌组织中表达升高,TGR5高表达是NSCLC患者预后不良的独立预测指标;2.TGR5通过活化JAK2/STAT3信号通路促进NSCLC细胞体外增殖、运动和体内肿瘤生长;3.NSCLC患者血清中胆汁酸水平较高,且与TGR5表达呈正相关;胆汁酸通过活化TGR5促进NSCLC细胞迁移和侵袭。本研究首次在国内外揭示了TGR5在NSCLC发生发展中的生物学作用,因此,TGR5有望成为判断NSCLC预后和治疗的新靶标。